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摘 要

Abstract III

第一章 引言 1

1.1胱抑素C（CYS-C） 1

1.2检测方法 1

1.3可检测的疾病及临床应用 1

1.3.1在评价肾脏功能中的应用 1

1.3.2在糖尿病中的应用 2

1.3.3在高血压肾病中的应用 2

1.3.4肾移植病人恢复情况的评估 3

1.3.5在心血管疾病中的应用 3

1.3.6在儿科中的应用 3

第二章 材料与方法 4

2.1仪器与试剂 4

2.1.1 仪器 4

2.1.2 原料 4

2.2实验方法原理 5

2.2.1试剂准备 5

2.2.2制备步骤 5

2.3免疫微球浓度的选择 6

2.4 PEG2000浓度的选择 6

2.5 CYS-C检测试剂组分 6

2.6 自制CYS-C检测试剂盒参数测定 7

2.6.1重复性实验 7

2.6.2稳定性测试 7

2.7 线性范围的测试 7

第三章 实验结果 8

3.1胶乳浓度的选择结果 8

3.2不同PEG2000浓度的比较结果 8

3.3试剂改变 9

第四章 自配试剂性能评测 13

4.1定标 13

4.2质控 14

4.3试剂重复性 14

4.4线性范围 15

4.5试剂稳定性测试 15

第五章 结果与讨论 17

致 谢 18

参考文献 19

胱氨酸蛋白酶抑制剂C（CYS-C）检测试剂的研发

摘 要

方法：进行试剂的配制，本试剂为双试剂（试剂主要由缓冲液组成，在试剂中加入不同比例的不同厂家的抗体进行检测）。进行校准液的多点定标曲线折线处理，确定能够使用的配方，进行对复溶后的血清样本测试，朗道质控的测试，稳定性的测试，抗干扰能力的测试等，使其配制出的试剂符合产品的性能指标。

结论：胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测试剂盒的研制，经过对于不同厂家的抗体与不同缓冲液配比的测试，确定了该补CYS-C试剂盒的各项指标能够达到对于临床检测的要求，能够有很大的应用前景，能够为临床早诊断、早治疗提供可靠的科学理论依据。也对进一步优化实验奠定了基础，能够早日的代替国外的同类产品的检测试剂盒。

关键词：胱抑素C；免疫比浊法；检测试剂盒

Development of Cystine Protease Inhibitor C (CYS-C) Detection Reagent

Abstract

Methods: the reagent was prepared. The reagent was a double reagent (the reagent was mainly composed of buffer, and the reagent was tested by adding antibodies from different manufacturers in different proportions). Carry out multi-point calibration curve polyline treatment of calibration solution, determine the formula that can be used, test the serum sample after reconstitution, test the quality control of lando, test the stability, test the anti-interference ability, etc., so that the reagent prepared by it can meet the performance index of the product.

Conclusion: C cystine protease inhibitors developed detection kits, through to the antibodies of different manufacturers and different buffer ratio test, determine the fill CYS-C kit can reach to the requirement of clinical testing, the indicators can have great application prospect, for clinical early diagnosis, early treatment to provide reliable scientific theory basis. It also lays a foundation for further optimization of the experiment and can replace the testing kits of similar foreign products as soon as possible.

Keywords: Cystatin C；Immunoturbidimetric method；Test kit

引言

1.1胱抑素C（CYS-C）

胱抑素C（CYS-C）是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂，也称为γ后球蛋白或γ微蛋白。CYS-C广泛存在于核细胞和各种组织的血液中^[1]。是一种低分子量碱性非糖基化的蛋白质。可由体内所有核细胞产生，在恒定屈服周期中的CYS-C仅由肾小球过滤，在近端小管中再吸收，但再吸收后完全代谢。分解，不再返回血液，血清CYS-C浓度不受性别，年龄，饮食和炎症等因素的影响。因此，血液浓度主要由肾小球滤过率决定，肾小球滤过率是反映肾小球滤过率变化的理想内源性标记。

1.2检测方法

胱抑素C（CYS-C）在对于分析方法的要求和选择上有着很高的特异性和敏感性，因为其在体内血液中的浓度很低，早期有单向免疫扩散法和酶免疫测定法，这两种测定方法灵敏度都较低。随后相继出现较为灵敏的放射、荧光及各种酶免疫测定方法，然而，这些测量方法是异质的、复杂的、耗时的，不能在临床上广泛应用。直到1994年，Kyhse Andersen J等人报告了Finney H等人报告的粒子增强传播免疫比浊法(粒子增强浊度免疫法)和粒子增强散射免疫比浊法(粒子增强散射免疫分析法)。1997年。这两种方法均可用于全自动生化分析仪测定胱抑素C，具有快速、稳定的特点，为临床应用提供了方便。

免疫比浊法：免疫比浊法（Immunoturbidimetric Assays）是抗原抗体结合动态测定方法^[2]。其基本原理是：当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规定抗体过量)时，形成的可溶性 免疫复合物在稀释系统中的促聚剂（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使反应液出现浊度。当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加。通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样中抗原的含量。

样品中的胱氨酸蛋白酶抑制剂C（CYS-C）与试剂中抗人CYS-C抗体胶乳颗粒发生凝集反应，即通过使用与抗体共价结合的胶乳颗粒予以增强免疫沉淀反应。在546nm处检测吸光度，其变化程度与样本中CYS-C含量成正比，参照多点定标校准曲线可计算出样本中CYS-C的含量。

1.3可检测的疾病及临床应用

1.3.1在评价肾脏功能中的应用

肾小球滤过率（GFR）：是目前世界上评估肾脏弄能最为全面和权威的且被人们认可的指标之一。在对于检测肾脏对外源性物质的清除率方面，肾小球滤过率检测是目前人们用来评价肾功能的最高标准。但由于肾小球滤过率（GFR）的检测耗时且价格昂贵，并不适用大多数人用检测常规肾脏功能。在临床实际应用中，常通过对内源性物质清除率的检测来反映GFR^[3]。

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