高原土壤G 细菌筛选

论文总字数：5075字

摘 要

关键词：高原土；微生物筛选；生物防治

Abstract: Plateau soil containing plains in the soil without some of the microbes, used in this study from the plateau soil R2A filter medium and the King"s medium to 67 strains, using plate bacteriostatic experiment of Ralstonia solanacearum inhibitory activity, found the green away seven strains of bacteria have inhibition, these bacteria will test its biological activity, further to the basin antagonism experiment bio-control microorganisms were screened.

Keywords：Plateau soil; microbial screening; biological control

1 绪论

青枯病又叫细菌性枯萎病，我国主要分布于华中、华东，华南和西南的部分地区，是茄科蔬菜常见病害。该病多在果实成熟期发生，棚室高湿时，露地进入雨季时发生严重，造成成果损失。最初病株白天萎蔫，傍晚以后恢复正常，连续几天后不再恢复而死亡，但植株仍保持绿色。茎基表皮粗糙，长有不定根，潮湿时有水渍状褐色菌液溢出。切取一段茎，将下端插入有清水的玻璃杯内，过小时左右，可见上端有乳白色的菌液溢出。病菌沿维管束侵入各个茎内，先侵入的先凋萎，后侵入的后凋萎，最后全株枯死。病茎下端往往表皮粗糙不平，纵剖近地面茎部，可见剖面内部为褐色，用手挤压有乳白色菌脓渗出，这是青枯病的重要特征（刘士亚等，2002；李怀方等，2001）。

由于青枯病分布范围较广，在热带和亚热带地区发生普遍，常常造成毁灭性灾害，严重影响了蔬菜生产（汪国平等，2003；杨琦凤等，2004）。发病植物茎叶萎蔫下垂直至全部枯死，是世界上危害最大、分布最广、造成损失最严重的植物病害之一，因此青枯病被称为植物的“癌症”。植物青枯菌（R. solanacearum）可侵染50多个科200多种植物（Hayward，1991），仅次于农杆菌（Agrobacterium tumerfaciens），是番茄、马铃薯、花生、甘薯、烟草、辣椒、茄子、生姜、草莓、香蕉以及一些贵重药材和花卉植物许多植物生产的重要限制因素（李怀方等，2001），世界各地均有分布。目前在我国的福建、广东、广西、四川、云南、湖南、江西、浙江、上海、江苏、安徽等省市（区）都有分布。由于病原细菌变异复杂（Wydra，2005），寄主范围广（Grimault，1994；Swanson，2005），化学防治效果不明显（Wydra，2005），防治十分困难。相对于化学杀虫剂，生物防治提供了一种有效而且对环境友好的方法来控制植物病害（Soad，2004）。

由于高原土壤相较于平原土壤来讲，所受空气污染较小，农业开垦度远远不及平原地区土地，而且由于高原地区独特的地理因素，海拔较高且气候较为寒冷，高原土壤所受紫外线照射远远多于平原地区。综合以上及其他各种因素，可以认为高原土壤可含有平原地区土壤中所没有的某些细菌和菌落，并且猜测这些会对平原地区土壤中原有的对特定农作物有害的微生物产生各种拮抗作用。从高原土壤中通过筛选，将土壤中的微生物分离出来并加以测试，从而筛选分离出有用的目标菌落，并确定其的拮抗能力。

2 材料与方法

2.1实验器材

1. 高原土壤样品：选取甘肃地区土壤（100g）
2. 培养基：R2A琼脂培养基（革兰氏阳性细菌），King氏培养基（革兰氏阴性细菌），改良型PDA培养基（用作拮抗测试）
3. 浓度梯度稀释工具（试管，移液枪等）
4. 平板划线工具（包括酒精灯，超净台，接种环等）
5. 灭菌水

6.恒温干燥箱，摇床，培养箱，培养皿，三角瓶等

2.2 试验方法

1.称取一定量的高原土壤土样（如100g），并将其置于烘箱中110℃过夜烘干，次日将其取出再次称重（质量记为m），确定其土壤水分含量（M水=100g-m）。并以此为依据将其补足试验初始设置的样品质量（即干土壤土样设为100g）。

2.将补足的土壤土样加入一定量的灭菌水（45ml，按1:10比例加入）放入摇床，震荡分层（充分震荡），形成菌悬液。

3.取1ml上层悬液进行系列浓度梯度稀释（按1/10ml进行稀释）。

4.进行平板划线（超净台），将培养基置于恒温37℃下适当培养时间后待长出菌落（所用器材及培养基等应提前全部灭菌）。（注意：G 用R2A进行培养，G-用king氏进行培养）。

5.待菌落长出后，挑单菌落纯化保培养保存。

6.测试：选取青枯菌以及所筛选菌种，在改良型PDA培养基进行拮抗作用的测试。

7.观察，拍照。

2.3 培养基配方

表1 四种培养基配方

3 实验结果

3.1 筛选实验结果

本次试验一共从土壤样品中筛选出67种菌株

图1 高原土样菌种筛选培养基

3.2 实验室青枯菌抑菌实验结果

图2 青枯菌抑菌实验培养基

其中C1-1，C1-2，C3，C7，C12，Ca-3,as-116共七种菌株其中心到抑菌圈边缘长度均超过5mm，具有较强的抑菌活性，而C2-7，C8，S7等虽具有抑菌圈但抑菌能力不强。

讨论

在实验中，我们可以看到在拮抗测试时，虽然有多种样品土壤微生物对青枯菌产生了有效的抑菌圈，可以用作生防菌剂。但是，在实际生产中，我们还应该在后续试验中测试其生物活性及盆钵拮抗实验进行进一步筛选。并不是所有筛选出的菌种都适合成为微生物菌剂，在农业中，还需考虑其生物活性，生产成本等问题。且青枯菌分布范围广，所受灾害的农产品种类多，在后续试验中，要进一步确认所筛选菌种的适用地区和产品种类。

参考文献

1. 汪国平, 袁四清, 熊正葵, 等. 广东省番茄青枯病相关研究概况. 广东农业科学[J], 2003,

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