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摘 要

本实验取淮阴师范学院镜月湖水水样，采用水滴分离法分离湖水中的淡水小球藻，对分离提纯后的小球藻进行增殖培养，分别等量一一接入含等量SE培养液的试管中研究不同pH值，温度，光照强度对小球藻的生长状况的影响，在人工气候箱中培养4天后，用分光光度计测量在OD值为650的情况下的吸光值，进行数据处理分析，得出实验结果，pH=7，光照强度为236 lux,温度为30℃为小球藻生长的最佳培养条件。

关键词：小球藻，吸光值，培养条件

Abstract: This experiments take Huaiyin Normal University mirror on lake water samples, water droplets separatedtungsten freshwater lake using chlorella, chlorella separation and purification of the proliferated after culture, respectively, the same amount of access to eleven medium containing equal amounts of SE tubes of different pH, temperature, light intensity on the growth conditions of Chlorella, and cultured for 4 days in a climatic chamber, is measured by a spectrophotometer absorbance at 650 cases in the OD, data process analysis, the results, pH = 7, light intensity of 236 lux, temperature 30 ℃ optimal culture conditions for the growth of Chlorella.

Keywords: Chlorella, absorbance, culture conditions

目录

1 前言 4

1.1 小球藻研究历程 4

1.2 小球藻的细胞形态 4

1.3 小球藻的营养价值 4

1.3.1 蛋白质 5

1.3.2 多糖 5

1.3.3 氨基酸 5

1.3.4 脂类 5

2 材料与方法 5

2.1 实验材料与仪器 5

2.2 SE培养基 5

2.3 实验方法 6

2.3.1 小球藻的分离 6

2.3.2 小球藻的培养 6

2.3.2 小球藻标准曲线的绘制 7

3 结果与讨论 8

3.1 小球藻细胞形态鉴定 8

3.2 小球藻培养实验数据结果 8

3.3 小球藻实验结果讨论分析 12

3.3.1 小球藻实验数据结果与分析 12

3.3.2 实验未能体现光抑制原因 12

3.3.3 小球藻最佳培养温度的差异性 12

结 论 13

参 考 文 献 14

致 谢 16

1 前言

1.1 小球藻研究历程

“微藻”对于我们来说是一个比较常见的名词。根据有关资料描述，居住在亚太地域的人们在近3000年前就已经开始认识并且利用海藻作为食品了。而早在1890年，荷兰微生物学家Beijerinck首先在琼脂平板上成功分离到了一种叫做小球藻的纯培养物。1919年，德国科学家Otto Warburg将小球藻在实验室里作为植物生理学的研究工具^［1-2］。从而证实：这些微藻没有非光合组织，光能利用效率很高，能连续快速增殖。由于小球藻蛋白质含量高，在20世纪40年代后期，美国、日本、德国和以色列开始对小球藻规模培养进行研究用来解决第二次世界大战期间的能源问题和战后的饥饿问题^［3］。二战期间，还利用小球藻的规模培养物筛选抗菌物质^［4］。到了70年代，日本以及中国台湾省也开展了生产小球藻的研究，他们用添加有机氮源的方法来提高小球藻的产量，而在当时，藻类生物基本上是作为低价值饲料。在80年代末期，微藻生物技术得到了很大的发展，微藻被作为化学品和药品资源得到开发，人们发现从藻类中能提取其他生物中难以得到的某些成分^［5］。本文主要研究培养液的PH，培养的温度，以及培养的光照强度对小球藻的生长状况的影响，通过实验数据处理分析得出小球藻培养的最佳培养条件。

1.2 小球藻的细胞形态

小球藻直径约为3-8微米，在分类上属于绿藻门，绿藻纲，绿球藻目，小球藻科，小球藻属，为真核球形单细胞藻类，是绿藻小球藻科中的一个重要属，包括大约10种，细胞形态为圆形或椭圆形，不光可以运用光能自养,还能在异养条件下利用有机碳源进行繁衍、生长；它不能形成合子，而是形成自体孢子进行繁殖，每个母细胞一次可分裂为4，8或16个子细胞^［6-7］。小球藻一般分布在土壤和淡水水域中，有的还以内共生体的形式出现在无脊椎动物体内^［8-9］。小球藻的叶绿体紧靠细胞膜，大多数种的细胞中还有一个蛋白核。

1.3 小球藻的营养价值

小球藻是一种营养价值很高的绿色食品，小球藻作为弱碱性食品 , 含有丰富均衡的各种营养成分，富含蛋白质、脂质、多糖、膳食纤维、维生素、微量元素、矿物质、叶酸、叶绿素及珍贵的生物活性素^［10］。并且还具备一些特别的医疗保健功效^［7］。小球藻提取液具备激活淋巴细胞、抵御外来疾病的入侵、提高机体免疫力、促进受伤组织修复等作用， 还能预防胃溃疡、心脑血管疾病和高血压，是现今国内外研讨开发的热门^［11-12］。

1.3.1 蛋白质

小球藻具有很高含量的蛋白质,但营养物质会因藻种品系、培育方式以及培养基的差别而有所差异。其中，蛋白核小球藻如果生长在良好的环境中，其细胞中的蛋白质含量一般不低于50%，明显高于植物蛋白源^［13］。

1.3.2 多糖

多糖是一类生物大分子，其普遍存在于植物和微生物细胞壁,动物细胞膜中。海洋面积广阔、具有储量丰富海藻类植物，这些海藻类植物除了富含优质蛋白质、氨基酸、纤维素外，还含有多种生物活性多糖，并且海藻生存环境各异，因此海藻多糖具备特有的生理活性，已经证明海藻多糖可用于多种医疗项目^［14-15］。小球藻多糖具有增强免疫活性的功效。小球藻该营养物质的特殊功效使其在医疗保健领域得到运用^［7］。

1.3.3 氨基酸

蛋白核小球藻蛋白质的必需氨基酸指数处于面粉、玉米面筋和花生仁等植物蛋白质这一等级。氨基酸种类齐全，完全能满足人和动物生长所需，在食品产业中可以作为营养强化剂，具有很高的发展前景^［16］。

1.3.4 脂类

小球藻细胞中总脂类经皂化后可以分为三部分：脂肪酸，难皂化物质和水溶性的造化产物^［17］。脂肪酸的积累小球藻细胞内使脂类含量增加。小球藻在正常条件和氮饥饿条件下生长，脂肪组成没有明显差别。小球藻细胞中不饱和脂肪酸的含量明显比许多植物中不饱和脂肪酸的含量高^［18］。

2 材料与方法

2.1 实验材料与仪器

实验藻种是用洁净灭菌的塑料瓶取自淮阴师范学院镜月湖的湖水。洗净灭菌后的微吸管，试管，量筒，玻片，三角烧瓶。电子秤，显微镜，无菌箱，分光光度计，灭菌锅，人工恒温气候箱，光照计，pH测试笔（pH试纸）。

2.2 SE培养基

SE是常见的绿藻培养基。一般来说，如果配制了母液，用母液来配培养基，灭菌后是不会产生沉淀的。配置的时候注意先将所需要的蒸馏水准备好，将需要的药品逐个加入，等到一种药品充分溶解之后再加入第二种。另外，土水在蒸馏过滤后，是不需要灭菌的，因为高压灭菌的过程会让其中的一些营养成分损失。

SE培养基配方如下：

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