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摘 要

玉米皮为玉米加工过程中产生的残渣，一般被廉价利用或丢弃，造成资源浪费的同时也产生了环境污染。灵芝在培养时，需要大量的营养物质，培育成本较高。本实验通过玉米皮煮液来培育灵芝，并优化其生长条件，来获得更多的灵芝多糖。经发酵条件优化，通过玉米皮煮液获取灵芝多糖的发酵工艺：玉米皮浆浓度10%，葡萄糖浓度5%，硫酸铵0.5%，在该发酵培养基条件下，培养基中灵芝多糖产量达到2.25±0.022g/L，相对原始发酵培养基灵芝多糖产量提高了近2倍。

关键词：灵芝；玉米皮；多糖；优化

Abstract: Corn husk corn residue generated during processing，generally be used or discarded cheap，also causing a waste of resources but also produce environmental pollution. Ganoderma need a lot of nutrients in the culture, foster higher costs. In this study, corn bran cooking liquid to cultivate fungus, and optimize growth conditions to get more Ganoderma lucidum polysaccharides. After optimization of fermentation conditions，get cooking liquid through a fermentation process of corn bran Ganoderma lucidum polysaccharides:10% corn bran plasma concentration，5% glucose concentration，0.5% Ammonium sulfate，Under the conditions of the fermentation medium，Ganoderma lucidum polysaccharides production in the medium reached 2.25 ± 0.022g / L, Relatively primitive fermentation medium of Ganoderma lucidum polysaccharides production increased nearly 2-fold.

Keyword: Ganoderma lucidum，Corn bran，polysaccharides，Optimization

目 录

1. 前言 4

1.1 灵芝多糖的介绍 4

1.2 灵芝多糖的作用 4

1.3 玉米皮介绍 4

1.4 灵芝发酵 4

1.5 实验目的 4

1.6 指导思想 5

2 材料与方法 6

2.1 材料 6

2.2 试剂 6

2.3 培养基 6

2.4 实验方法 6

2.4.1 实验器材 6

2.4.2 菌种活化 6

2.4.3 种子制备 6

2.4.4 灵芝多糖提取 7

2.4.5 葡萄糖标准曲线测定 7

2.4.6 灵芝多糖含量测定 7

3 结果与分析 8

3.1 不同玉米皮固液比煮液对灵芝多糖发酵的影响 8

3.2 不同碳源对灵芝多糖发酵的影响 8

3.3 不同氮源对灵芝多糖发酵的影响 9

3.4 响应面分析 10

3.5 优化实验 14

4结论与展望 15

4.1 结论 15

4.2 展望 15

参考文献......................................................................................................................16

致谢 17

1. 前言

1.1灵芝多糖的介绍

　灵芝多糖目前已分离到的有200多种，其中大部分为β–葡聚糖，少数为α–葡聚糖，多糖链由三股单糖链构成，是一种螺旋状立体构形物，其立体构形和DNA、RNA相似，螺旋层之间主要以氢键固定，分子量从数百到数十万，除一小部分小分子多糖外，大多不溶于高浓度酒精，在热水中溶解，大多存在于灵芝细胞内壁。灵芝多糖大多为异多糖，即除含有葡萄糖外，大多还含有少量阿拉伯糖、木糖、岩藻糖、鼠李糖、半乳糖等其他单糖。灵芝多糖在国外亦在进行广泛、深入研究。

1.2灵芝多糖的作用

灵芝多糖是灵芝中最有效的成分之一，因此，也特别受到医药科技工作者的重视，研究报道也最多。现知灵芝多糖有广泛的药理活性，能提高机体免疫力，提高机体耐缺氧能力，消除自由基，抑制肿瘤^[1]、抗辐射，提高肝脏、骨髓、血液合成DNA、RNA、蛋白质能力，延长寿命^[2,3]，灵芝多糖还具有刺激宿主非特异性抗性、免疫特异反应以及抑制移植肿瘤生理活性的特性。多糖分子量大于1×104时显示强抑制肿瘤活性，活性强弱还与多糖链分叉的程度及支链上羟基的数量有关。对心血管疾病、气喘、过敏、神经衰弱、胃热等有显著效果。还具有降血压、降血脂^[4]、解血瘀、改善血液循环、皮肤美容等作用^[5]。灵芝的多种药理活性大多和灵芝多糖有关^[6]。

1.3玉米皮介绍

玉米皮指的是玉米籽粒的表皮部分，有的称玉米纤维或玉米渣，是玉米加工淀粉的副产物，商品玉米皮一般占玉米质量的8%～10%。在湿法加工淀粉时，被分晒出来。但是现在阶段，玉米皮并未被完全利用，大多数是被丢弃，不仅造成了环境的污染，而且造成了资源的严重浪废。

1.4灵芝发酵

灵芝由于具有许多重要的生物活性，而受到人们的关注，与传统的固体发酵相比，灵芝液体发酵技术具有生产周期短，品质稳定，产量高，易于控制等优点。目前灵芝发酵的研究主要集中于发酵的优化方面，主要包括发酵培养基组分及发酵条件的优化，而且也取得了不小的成果，还有就是从发酵菌株本身入手，通过筛选、诱变等处理方法获得高活性或高产量菌株。

1.5实验目的

本实验的主要目的就是利用玉米皮来培养灵芝，不仅降低了灵芝培养的成本，而且使得玉米皮得到了利用，节约了资源和减少了环境污染。并通过优化实验条件来获取更多的灵芝多糖。

1.6指导思想

通过玉米皮蒸煮，得到玉米皮溶液。先通过单因素分析，考虑碳源对发酵的影响，主要是葡萄糖及淀粉。在考虑氮源对发酵的影响，主要是蛋白胨和硫酸铵。最后通过SAS软件进行响应面分析，得出优化组，并进行修正。

2 材料与方法

2.1 材料

菌种：灵芝（Ganoderma lucidum)，来源于江苏省生物只能与酶技术重点实验室。玉米皮：市售。

2.2 试剂

试剂名	级别	厂家
葡萄糖	分析纯（AR）	国药集团化学试剂有限公司
琼脂	分析纯（AR）	国药集团化学试剂有限公司
无水乙醇	分析纯（AR）	国药集团化学试剂有限公司
浓硫酸	分析纯（AR）	南京化学试剂有限公司
苯酚	分析纯（AR）	扬中县化工厂
淀粉	分析纯（AR）	国药集团化学试剂有限公司
胰蛋白酶	生化试剂（BR）	国药集团化学试剂有限公司
硫酸铵	分析纯（AR）	江苏省强盛化工有限公司

2.3 培养基

斜面培养基（PDA培养基）： 土豆20％，葡萄糖2％，琼脂2％，自来水1000mL。

种子培养基：土豆20％，葡萄糖2％，自来水1000mL。

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