高速逆流色谱分离野马追化合物的条件研究

论文总字数：9007字

摘 要

应用高速逆流色谱法分离制备野马追中的萜类化合物。以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水（3：5：3：3，V/V）为两相溶剂系统，用上相作为固定相，下相作为流动相，在主机转速为900r/min、流动相转速为2.0mL/min、检测波长为254nm条件下进行分离制备。对所收集的峰用高效液相色谱进行纯度检测，对纯度较高的2种化合物(按出峰次序标为1、2)进行结构鉴定，化合物1为3β-Hydroxy-8β-[4"-hydroxytigloyloxy]-costunolide，化合物2为eupalinolide A，其纯度为78.44%和77.72%。

关键词：野马追，高速逆流色谱，高效液相色谱，萜类化合物，分离

Abstract: Terpenoids from Eupatorium lind-leyanum were separated by high-speed countercurrent chromatography. The separation was performed using a two-phase solvent system composed of n-hexane, ethyl acetate, methanol and water (3:5:3:3, V/V) at a flow rate of 2.0 mL/min, and rotation speed and detection wavelength were set at 900r/min and 254nm, respectively. The lower phase was used as the mobile phase and the upper was used as the stationary phase in the head totail elution mode. Two terpenoids were detected by HPLC. The purities of peaks 1 and 2 were 78.44% and 77.72%, respectively. Their structures were characterized as 3β-Hydroxy-8β-[4"-hydroxytigloyloxy]-costunolide and eupalinolide A by ESI-MS and NMR.

Keywords: Eupatorium lindleanumDC, high-speed countercurrent chromatography (HSCCC), HPLC, terpenoids, separation and purification

目 录

1 前言 3

2 材料与方法 4

2.1 材料 4

2.2 主要设备和仪器 4

2.3 野马追萃取物的制备 5

2.4 两相溶剂的选择 5

2.5 溶剂体系的制备和样品溶液的配置 5

2.6 HSCCC分离制备方法 5

2.7 HSCCC分析测定 6

3 结果与讨论 6

3.1 HSCCC溶剂体系的选择 6

3.2 HSCCC分离纯化结果 6

3.3 结构鉴定 7

结 论 9

参 考 文 献 10

致 谢 11

1 前言

高速逆流色谱是（HSCCC）是一种由美国科学家Ito博士在1982年研究发明的^[1]，能快速实现液-液分离制备的色谱技术。早期的逆流色谱装置是封闭型的，主要用于蛋白质和燃料的分离。后期经Ito博士的研究开发，创新的在螺旋管柱中引入流通机制，使其能够连续的分离制备样品。高速逆流色谱是一种以流体动力学平衡为基础的^[2]，具有单向性和逆流性的色谱分离技术，利用螺旋管在高速旋转下产生的离心力，两相溶剂体系在高速旋转的螺旋管内不断进行混合、静置，以其中一相作为固定相，另一相作为流动相，使溶剂体系达到一种特殊的单向性流体动力学平衡，组分在旋转螺旋管内依据相对移动而互不混溶的两相溶剂间分配不同而获得分离，后按分配系数的大小次序，分子量大的先洗脱，分子量小的被包裹在凝胶颗粒中最后被洗脱出来。其设计原理图如图1^[3]所示。

图1 多层螺旋管行星式离心分配色谱仪

高速逆流色谱能使两相溶剂中各组分得以分离，主要是由于各组分的溶解度和分配能力不一样，并不依靠固体的支撑，因此能够将利用后的样品全部回收。与传统的固—液柱色谱技术相比，它具有应用范围广、操作简便、快速、效率高、产量大、成本低等优点^[4]；与一般逆流萃取技术相比，在高速旋转的的分离过程中，由于离心力的作用，溶质与溶剂更能充分的混合，比一般利用萃取动力学形成吸力的萃取效果好。

野马追为菊科泽兰属植物轮叶泽兰（Eupatorium lindleyanum DC.）的干燥上部分^[5]，对环境要求较高，喜温暖湿润，忌寒冷干燥，所以在多雨季节生长旺盛，而雨水充足的华东、华南、华北、东北及台湾等地成了它的主要生长地点。野马追一般生长在潮湿山坡，草地或溪边。直立的茎上半部分为淡褐色或带紫色的枝，茎上散生紫色斑点，被粗毛，幼时尤为细密。少柄甚至是无柄，叶片对生呈条状披针形，基部为3裂或者不裂，边缘长有疏锯齿，两面粗糙，下面或仅沿脉有细柔毛，或者无毛。下面存在黄色腺点，基出3脉，脉在下面隆起，形状为头状花序状或总苞钟状，总苞片为9，颜色为淡绿色或者带紫红色，

管状花5朵，颜色为淡紫色。瘦果有腺点，无毛。花、果期为5-12月。

野马追是平性的药物，可以用来熬成汤药口服，因为它的药性比较缓和，所以不管寒性或者热的病症，它都能使用，它的味道很苦。野马追可以用来治疗咳嗽、高血压等疾病。临床常用于治疗慢性支气管炎，止咳效果非常好，但疗效会随着病程延长而逐渐降低，同时具有一些口感、头痛等轻微富作用。秋天是野马追收获的季节，将它采集后进行晒干储藏。萜类化合物是野马追的化学成分中研究最多的物质。

萜类化合物的通式为(C₅Hm)n，它的形状为环状或者链状。萜类化合物味苦，常温下易挥发，多为结晶体，具有旋光性和折光性，尤其是低分子萜类化合物具有较高折光率。萜类化合物有以下几个相似点：大都具有双键、共轭双键与活泼氢、大都具有内酯结构。它们虽然不是植物生长发育必不可少的，但是对调节环境与植物的功能有着重要的生态功能。萜类化合物有较高的亲脂性，化学成分中的单萜和倍半萜能跟着水蒸汽一起被蒸馏，可在热水中溶解。

2 材料与方法

2.1 材料

野马追：采购于江苏盱眙王店乡；甲醇：分析纯，南京市集团化学试剂有限公司；正己烷：分析纯，南京市集团化学试剂有限公司；乙酸乙酯：分析纯，国药集团化学试剂有限公司。

2.2 主要设备仪器

剩余内容已隐藏，请支付后下载全文，论文总字数：9007字