载脂蛋白A1（ApoA1）检测试剂盒的研制

论文总字数：21738字

摘 要

本实验是通过建立载脂蛋白A1，用购买的抗体与不同配比的缓冲液进行测试，利用免疫比浊法，研制出载脂蛋白A1（ApoA1）检测试剂盒，以及后续的一些实验的质控，稳定性等的测试，对动脉粥样硬化进行检测，要求检测限的试剂空白吸光度（光径1.0cm，波长600nm）≤0.20，线性范围为0.1-2.3g/L，R²≥0.990，准确度：相对偏差±≤10%，精密度：批内精密度CV≤3%，批间差R≤10%，符合国家检测试剂盒标准。对后期用于临床动脉粥样硬化的血清中载脂蛋白A1的检测打下基础。

关键词:载脂蛋白A1；免疫比浊法；检测试剂盒；缓冲液

Development of Apolipoprotein A1 Assay Kit

Abstract

In this experiment, the apolipoprotein A1 (ApoA1) detection kit was developed through the establishment of apolipoprotein A1 immunoturbidimetric method, and the purchased antibodies and buffers of different ratios were tested, and the apolipoprotein A1 (ApoA1) detection kit was developed, and the quality control of some subsequent experiments Stability test, to detect atherosclerosis, the reagent blank absorbance (optical path 1.0cm, wavelength 600nm) required to detect limit is≤0.20, linear range is 0.1-2.3g/L,R²≥0.990, accuracy: Relative deviation±≤10%, precision: intra-assay precision CV≤3%, inter-assay difference R≤10%, in line with national testing kit standards. To lay the foundation for the detection of apolipoprotein A1 in serum for clinical atherosclerosis in the later stage.

Keywords:Apolipoprotein A1，Immune Turbidimetry，Detection Kit，Buffer

目 录

摘 要 I

Abstract II

第一章 引 言 1

1.1 实验基本介绍 1

1.1.1 实验设计背景 1

1.1.2 载脂蛋白A1的意义 1

1.2 动脉粥样硬化性疾病 1

1.3 免疫比浊检测方法 2

第二章 实验仪器原料 3

2.1 仪器与原料 3

2.1.1 主要仪器 3

2.1.2 主要原料 3

第三章 试剂配制 4

3.1 配制方法 4

3.1.1 缓冲液的配制 4

3.1.2 试剂的配制 5

3.2 校准品 6

3.3 实验条件 6

3.4 检验原理 6

第四章 实验方案测量记录 7

4.1 实验方法和数据记录 7

4.1.1 菲鹏抗体的实验操作内容及数据分析 7

4.1.2 菲鹏抗体最终的试剂配方确认 15

4.2 不同厂家抗体定标数据 15

4.2.1 ABM试剂定标 15

4.2.2 钹乐诗抗体定标 15

4.2.3 阿匹斯抗体定标 16

4.2.4 佰泰科抗体定标 16

4.2.5 海奥斯抗体定标 17

4.2.6 定标数据分析 17

第五章 试剂性能测试 18

5.1 试剂定标测试 18

5.2 朗道质控的测试 18

5.3 血清样本的测试 19

5.4 稳定性的测试 20

5.4.1 稳定性的定义 20

5.4.2 稳定性测试的值 20

5.4.3 稳定性测试的结论 21

5.5 线性范围测试 21

5.6 精密度的测试 21

5.6.1 重复性测试 22

5.6.2 批间差测试 22

5.7 干扰实验 23

第六章 实验结论 24

致 谢 25

参考文献（References） 26

第一章 引 言

1.1 实验基本介绍

1.1.1 实验设计背景

近年来，随着社会的不断进步和发展，动脉粥样硬化在我们生活中已经非常常见，在以往，动脉粥样硬化只存在于老年人中，但现在越来越多的年轻人在每年体检时常发现有动脉粥样硬化改变，在过去，人们认为这种病在40岁以后的中老年人中更为普遍^[1]，在49岁以后则发展得更快，但是现在越来越多的年轻人患有无症状的动脉粥样硬化，其病理变化在青少年甚至儿童期已经开始，到了中老年才表现出来而已。

在欧美一些发达国家，动脉粥样硬化仍然是死亡和残疾的主要原因。在我们国家，随着生活节奏和饮食结构的变化，动粥样硬化脉现已跃居于人口死亡的主要原因之列。到目前为止，其发病率仍在迅速上升^[2]。

目前研究表明，载脂蛋白A1（ApoA1）是构成高密度脂蛋白HDL的主要蛋白，其主要功能是维持脂蛋白结构和脂质转运并调节脂质代谢^[3]。目前公认ApoA1增加是抵抗动脉粥样硬化（As）发生的保护因素。

1.1.2 载脂蛋白A1的意义

载脂蛋白A1的测定是评估心血管疾病危险因素的指标。这对于发现和诊断载脂蛋白异常以及研究动脉粥样硬化中脂质代谢和载脂蛋白的发展非常重要。由于ApoA1主要存在于HDL（高密度脂蛋白）中，因此它主要反映了高密度脂蛋白（HDL）的水平，并且高密度脂蛋白和胆固醇（HDL-C）之间呈正相关^[4]。在冠心病患者中，ApoA1水平较低，在脑血管患者中，ApoA1水平也显著较低，并且ApoA1缺乏症、家族性低a脂蛋白血症、鱼眼病等血清中ApoA1和HDL-C极低^[5]。

研究表明，人体中载脂蛋白A1的水平与高密度脂蛋白的水平呈显著正相关，与动脉粥样硬化的程度以及相关的心脑血管疾病且呈负相关，有效反映了动脉粥样硬化性心脑血管疾病的发病风险^[6]。对于疾病的预防具有非常重要的作用。

1.2 动脉粥样硬化性疾病

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