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摘 要

VB₁₂测定含量主要有三种方法：微生物法、紫外分光光度法以及高效液相色谱法。微生物法则测定时间较长，并且测定步骤繁多，一般很少用于药品的含量测定。药品中VB₁₂含量分析通常采取紫外分光光度法，但是实验室按照标准对VB₁₂进行UV检测，结果与供应商HPLC结果相比含量持续偏高，导致产品中VB₁₂检测结果进行折算投料，有导致成品VB₁₂含量偏低的风险，通过对大量样品的检测,发现紫外分光光度法会导致成品VB₁₂含量偏低的风险。高效液相色谱法具有准确，简单和快速的特性，在定量分析中存在很大的优势，因此采取高效液相色谱法进行VB₁₂含量的测定。

本课题简要阐述VB₁₂含量测试方法优化、过程中的测试范围、试剂和意义。具有以下三个方面的意义：

1. 能够较好地全面了解到高效液相色谱的性能特征;

2. 能够通过一个完整的测试方法来对VB₁₂含量测定的优化;

3. 能够较全面的认识到精确的含量测定的重要性。

关键词：HPLC；UV；VB₁₂；含量测定

Optimization and verification of VB12 content test method

Abstract

There are three methods to determine the content of vitamin B₁₂: microbiological method, ultraviolet spectrophotometry and high performance liquid chromatography. Microbiological method has a long time and many steps, so it is rarely used in the determination of drugs. The content of VB₁₂ in drugs is usually analyzed by UV spectrophotometry, but the laboratory carries out UV detection on VB₁₂ according to the standard, and the results are higher than the supplier's HPLC re sults, which leads to the conversion of VB12 detection results in the products and the risk of lower VB₁₂ content in the finished products, It is found that UV spectrophotometry will lead to the risk of low content of VB₁₂ in the finished product,. High performance liquid chromatography has the characteristics of accuracy, simplicity and rapidity. It has great advantages in quantitative analysis. Therefore, high performance liquid chromatography is adopted to determine the content of VB₁₂.

This topic briefly describes the optimization of VB₁₂ content test method, test range, reagent and significance in the process. It has the following three aspects of significance

1. Be able to fully understand the performance characteristics of HPLC;

2. Be able to optimize the content determination of VB₁₂ through a complete test method;

3. Be able to fully realize the importance of accurate content determination.

Keywords: HPLC, UV, VB₁₂, Content Determination

目 录

摘 要 I

Abstract II

第一章 引 言 1

1.1 选题背景 1

1.2 选题意义 1

1.3 课题关键问题及难点 3

1.3.1 课题难点 3

1.3.2 课题关键问题 3

1.4 微生物法 3

1.5 紫外分光光度法 4

1.6 高效液相色谱法 4

第二章 仪器与仪表 5

2.1 试剂 5

2.2 仪器 5

2.3 溶液配制 5

2.3.1 标准溶液配制 5

2.3.2 样品溶液制备 5

2.4 液相色谱条件 5

2.5 数据计算 6

2.5.1 系统匹配度 6

2.5.2 计算 6

第三章 结果与分析（验证特性和验收准则） 7

3.1 专属性（Specificity） 7

3.1.1 验收标准 7

3.2 精密度（Precision） 8

3.2.1 重复性(Repeatability) 8

3.2.2 中间精密度(Intermediate Precision） 8

3.3 线性范围（linearity Range） 9

3.4 准确度（Accuracy） 11

3.5 溶液稳定性 12

3.5.1 标准溶液稳定性 12

3.5.2 样品溶液稳定性 13

3.6 耐用性（Robustness） 13

3.7 等效 14

第四章 总 结 15

4.1 小结 15

4.2 展望 15

致 谢 17

参考文献 18

引 言

1.1 选题背景

VB₁₂是所有维生素中分子最大,分子最复杂的一种维生素。^[1]比如动物肝脏、鸡蛋、牛奶这类动物性食品是VB₁₂的最主要来源。^[2]维生素B₁₂能促进红细胞的新陈代谢对贫血起到预防作用。^[3]一般用于治疗恶性贫血，食欲大大提升，提高身体素质,维持神经系统的正常，发展记忆力，拥有平衡感。更好的吸收蛋白质与脂肪，同时也会在与叶酸合用的情况下起辅助作用，比如肝炎和白细胞减少症。并且VB₁₂可以有效提高叶酸的利用率,若叶酸在实际利用过程中缺乏VB₁₂,则对叶酸的实际利用率可能会受到很大的影响，VB₁₂缺乏可能会导致周围神经炎。^[4]但对于人体来说,对VB₁₂的需求量可能是所有的维生素中最少的一种，大概3微克左右就能满足人体一天的需要。VB12若服用过量,会产生欠佳反应。因此VB₁₂含量的准确测定对于VB₁₂药品成品具有重要意义。^[5]

根据目前的相关研究资料，维生素B₁₂测定含量主要有三种方法：微生物法、UV、HPLC。^[6]微生物法灵敏度较高，可以检测出溶液中0.01ng/ml的含量,不过微生物法：实验操作和工艺复杂，掌握难度大,检验的时候要花费的工作时间长,并且实验中可以影响因素多，种种原因导致需要付出成本系数高等。无法推广；同时因为稀释倍数比较大且难准确掌握等,可导致测定误差较大。高效液相色谱法和紫外分光光度法一般都用于药品类等含量较高的样品(一般含量mg/g级)。

1.2 选题意义

在进行VB₁₂含量测定时，使用的紫外分光光度法，VB₁₂的含量进行UV检测，但是结果与供应商HPLC结果相比含量持续偏高，共6次的两者的差别平均数为：0.10，导致产品中VB₁₂如按照UV检测结果进行折算投料，可能有导致成品VB₁₂含量偏低的风险。

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