论文总字数：19351字

摘 要

本文旨在对现有版本的UA体外诊断试剂进行改进，目的是为了降低胆红素和VC对检测结果的干扰，以及解决原先配方试剂灵敏度低的问题。通过改变亚铁氰化钾的含量，来测试对胆红素的抗干扰能力是否提升。

关键词：尿酸；尿酸酶法；VC；胆红素；抗干扰

Improvement Of UA In Vitro Diagnostic Kit

Abstract

The aim of this experiment is to improve the existing version of UA in vitro diagnostic reagents to reduce the interference of bil iru bin and VC and to solve the problem of low sensitivity of the original formulation reagent .The anti - interference resistance to bil iru bin is tested by varying the content of potassium ferro cyanide .

Keywords: Keywords Uric Acid; Uric Acid Enzyme; VC; Bilirubin; Anti-Interference

目录

摘 要 I

Abstract II

第一章引言 1

1.1 UA体外诊断试剂盒 1

1.2 实验设计思路 1

1.3 实验计划 1

1.3 实验步骤 1

第二章尿酸UA体外诊断试剂盒的研制 3

2.1 尿酸过高的危害 3

2.2 检验原理 3

2.3 主要组成成分 3

2.4主要仪器与试剂 4

2.4.1主要仪器 4

2.4.2主要试剂 4

2.4.3中英文对照 5

2.5试剂准备 5

2.6校准品 7

2.7实验阶段 7

2.7.1第一次实验 7

2.7.2第二次实验 10

2.7.3第三次实验 12

2.7.4第四次实验 14

2.7.5第五次实验 16

2.8关于开瓶和老化测试 18

2.8.1做开瓶和老化测试的意义 18

2.8.2如何进行开瓶和老化测试^[14] 18

2.9反应体系的选择 18

第三章总结 19

致谢 20

参考文献 21

第一章引言

1.1 UA体外诊断试剂盒

体外诊断试剂和器械统称为体外诊断医疗器械，是属于医疗器械的一部分^[1]。而其中体外诊断试剂指的是：可以单独使用或者与仪器、设备或系统组合使用，在疾病的预防、诊断、治疗监测、预后观察、健康状态评价以及遗传性疾病的预测过程中，用于对人体样本（各种体液、细胞、组织样本等）进行体外检测的试剂、试剂盒、校准品（物）、质控品（物）等。UA体外诊断试剂盒用于体外定量检测人血清中尿酸（UA）的含量。尿酸是核酸中嘌呤分解代谢的最终产物^[2]，由肾脏排泄，随尿液排出体外。肾脏疾病（如急慢性肾小球炎、肾结石等）、痛风、以及体内核酸分解代谢过盛的疾病（如慢性白血病、真性红细胞增多症等）可使血清尿酸含量增高^[3]。目前临床上或实验室采用的检测方法主要有磷钨酸法、尿酸酶法（一步法、偶联法）、高效液相色谱法、酶法（紫外分光光度法、酶偶联法）^[4]等。本文UA体外诊断试剂盒采用尿酸酶法，实验原理是：尿酸和尿酸酶在过氧化物酶的催化下，反应生成醌色素，在520nm处通过测定醌色素的吸光度，求出UA的含量。

1.2 实验设计思路

1.试剂抗胆红素干扰能力差的问题：从亚铁氰化钾和胆红素氧化酶两个思路着手，分别评价抗干扰效果。

2.试剂灵敏度低的问题：从显色底物和尿酸酶的厂商品牌和用量着手，分别评价灵敏度的高低。

1.3 实验计划

1.筛选主要原材料：根据实验思路，对抗干扰物、显色底物及尿酸酶进行筛选。

2.试样：根据现有工艺，摸索抗干扰特性进行轻实验，确定可行性。

3.小试：进一步优化抗干扰性，从抗胆红素干扰、抗VC干扰及试剂的灵敏度，着手进行评估，计划时间2-3周。

4.稳定性评价：开瓶测试、加速测试（老化测试）、效期稳定性实验，计划4-6周。

5.中试：1-2批。

6.产品检测：中试样品进行全性能检测。

1.3 实验步骤

1.确定毕业设计题目。

2.学习并了解UA的配置方法。

3.学习生化仪AU480的操作和维护。

4.开始配制UA双试剂并采用不同配方以作对照，使用生化仪AU480进行检测和分析。

5.保存配制好的试剂并以保留活性，合理摆放和储存所使用的药品试剂，配制过程做好个人安全防护措施。

6.配制完成后的试剂盖上保鲜膜保存在冰箱4℃环境中。

7.配置过程中要保证酶的活性，注意温度和时间的控制，保证操作方法准确，以确保后续的实验结果准确。

8.试剂完成后需要进行老化实验，即放置在37℃恒温箱中进行为期一个月的实验，以检测试剂的稳定性。同期进行开瓶实验，即开盖后放置在4℃冰箱环境中进行为期一个月的实验，以检测试剂的稳定性。

9.及时的记录数据，对每次的实验数据都能进行合理准确的分析，使之后的实验有更充足的实验数据作为支撑从而进行下去。

10.实验试剂配制的原料选择，抗体血清的选择，以及生产厂家的记录，保证自己的得到的试剂具有较高的性价比，能够达到预期的效果。

11.在实验成功后，要考察试剂的稳定性，各项性能指标，以及是否符合各项产品规定等。

第二章尿酸UA体外诊断试剂盒的研制

2.1 尿酸过高的危害

在生理状态下，体内尿酸池为1200 mg，每天产生尿酸约750 mg，排出约800~1000 mg，其中30%从肠道和胆道排泄，70%经肾脏排泄。肾脏是尿酸排泄的重要器官，如果肾肌酐清除率减少5%~25%，就可导致高尿酸血症（Hyperuricemia，HUA）^[5]。

正常情况下，人体每天尿酸的产生和排泄基本上保持动态平衡，凡是影响血清尿酸生成和排泄的因素均可以导致血清尿酸水平增高。尿酸在血液中的最高溶解度为420μmol/L，超过此值，尿酸盐即易析出结晶而沉积于组织并引起炎性病变，例如沉积于关节，即引起大家熟知的痛风性关节炎^[6]。

一般认为，对无症状性高尿酸血症无须治疗。但也不是不管它，因为高尿酸血症毕竟是不正常的。持久的高血尿酸，有可能造成尿酸结晶和尿酸盐结晶在肾盂、输尿管或肾小管及肾间质沉积，造成肾损害，引起肾结石，所以应该寻找高血尿酸的原因，如利尿药、降压药、化疗药等药物因素及肾病、血液病、糖尿病等^[7]，找出原因，同时应避免肥胖、高嘌呤及高热量饮食、酗酒、过度疲劳、精神紧张、创伤、湿冷等诱发因素^[8]。降低血尿酸，这是有益无害的事。

2.2 检验原理

本试剂盒采用尿酸酶法测定尿酸含量，通过单一的酶促反应后利用醌色素在520nm处的吸光度来求出尿酸的含量，其反应式^[9]如式：

反应发生在磷酸盐缓冲液中，在试剂配置好后需要混匀并在37℃下恒温孵育10分钟，本实验使用生化仪AU480进行吸光度检测，校准品为朗道校准血清，采用两点定标线性处理，通过检测在520nm处醌色素的吸光度来求出尿酸含量，从而进行诊断。

2.3 主要组成成分

表2.1主要组成成分表

表2.1（续）

2.4主要仪器与试剂

2.4.1主要仪器

表2.2实验仪器及型号及厂家

2.4.2主要试剂

表2.3实验试剂批号及厂家

表2.3（续）

2.4.3中英文对照

表2.4实中英文对照表

2.5试剂准备

UA检测试剂盒为双试剂，由R1和R2组成，此外，还需要配制用于进行抗干扰^[10]实验的干扰溶液（VC^[11]溶液和胆红素^[12]溶液）：

1.R1的配制过程如下：（据初步预算估计R1所需用量500ml）

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