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摘 要

CIDEA基因是CIDE基因家族中的一个重要成员，现阶段，有关CIDE家族的研究已经很多了，研究表明CIDE家族基因所表达的CIDE蛋白的过度表达可以导致细胞凋亡的发生。在CIDE蛋白家族中，已报道有三个成员来源于人(hCIDEA、hCIDEB和hCIDEC)，三个成员来源于小鼠(mCIDEA,mCIDEB和脂肪特异性蛋白27(Fat-specific protein of 27 kDa,FSP27;是人CIDEC在小鼠中的同源蛋白)^【1】，CIDE蛋白家族除了具有前凋亡蛋白的功能外，在脂代谢和脂肪细胞分化调控过程中也有很重要的作用，所以CIDE家族的基因也是作为人类肥胖的候选基因之一的^【2】。

其中，CIDEA基因作为CIDE家族中的一员，秉承了CIDE家族的引发细胞凋亡的传统和脂代谢和脂肪细胞分化调控过程中的重要作用。而且，在蛋白质水平上，人CIDEA与小鼠CIDEA享有80.5%相似性^【3】。

虽然现有CIDEA基因的研究已经很多了，但是在小鼠耳蜗中的研究还没有，所以我们的实验一方面是为了填补CIDEA基因在这方面的空白，另一方面是为了通过研究CIDEA基因在小鼠耳蜗中的机制，最终探究能否通过敲除CIDEA基因而避免新霉素对耳蜗的损伤。

本课题验证了CIDEA基因在耳蜗中的表达以及其表达随新霉素损伤而发生的增加，未来可以探究在敲除CIDEA基因的情况下，新霉素是否还会继续引起耳蜗毛细胞的凋亡。

关键词：CIDEA ，细胞凋亡， 新霉素损伤 ，耳蜗 ，毛细胞。

Abstract

The CIDEA gene is an important member of the CIDE gene family. At the present stage, many studies have been made about the CIDE family. The study shows that the overexpression of the CIDE protein expressed by the CIDE family gene can lead to the occurrence of cell apoptosis. In the CIDE protein family, three members have been reported to be derived from human (hCIDEA, hCIDEB and hCIDEC), and three members are derived from mice (mCIDEA, mCIDEB and Fat-specific protein of 27 kDa, FSP27; the human CIDEC is homologous protein in mice). CIDE gene family also plays an important role in the regulation of adipocyte differentiation, so it is one of the candidate genes for human obesity. At protein level, human CIDEA has 80.5% similarity with mouse CIDEA.

Among them, the CIDEA gene, as a member of the CIDE family, plays an important role in the traditional and lipid metabolism and the regulation of adipocyte differentiation in the CIDE family.

Although there are many studies on the existing CIDEA gene, there is no research in the mouse cochlea, so our experiment is to study the gap in the CIDEA gene in this area. and on the other hand, to study the mechanism of the CIDEA gene in the cochlea of the mouse. and to explore the possibility of avoiding the damage of neomycin to the cochlea the CIDEA gene by knocking out the CIDEA gene.

The present study verified the expression of CIDEA gene in the cochlea and the increase of its expression with neomycin damage. In the future, it is possible to explore whether neomycin will continue to induce the apoptosis of cochlear hair cells in the case of knockout CIDEA gene.

KEY WORDS: CIDEA , Apoptosis , Neomycin injury , Cochlea , Hair cells.

目录

摘要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1 CIDEA基因的相关研究 1

1.2 新霉素对听觉的影响 1

1.2.1 耳蜗在听觉中的重要作用 1

1.2.2 新霉素对发育过程中小鼠听力及对内耳毛细胞的毒性作用 3

第二章 实验材料与方法 4

2.1 实验原理 4

2.1.1 新生鼠耳蜗组织提取 4

2.1.2 CIDEA基因表达的检测 4

2.1.3 小鼠基因型鉴定 5

2.2 实验仪器及试剂 5

2.2.1 实验仪器 5

2.2.2 实验试剂 6

2.2.3 实验耗材 7

2.2.4 试剂配制 7

2.3 实验方法 8

2.3.1 小鼠耳蜗组织的提取 8

2.3.2 RT-PCR技术检测耳蜗中CIDEA基因转录的RNA生成量 10

2.3.3 Western小鼠耳蜗组织CIDEA相关蛋白表达量 11

2.3.4 新生鼠耳蜗组织铺片免疫荧光观察 15

2.3.5 小鼠基因型的鉴定 17

第三章 实验结果与讨论 18

3.1 基因型鉴定的结果 18

3.2 RT-PCR检测耳蜗中CIDEA基因转录的RNA生成量的结果 19

3.3 新生鼠耳蜗组织铺片免疫荧光观察的结果 21

第四章 小结与展望 23

4.1 小结 23

4.2 展望 23

致谢 24

参考文献 25

文献综述

CIDEA基因的相关研究

有关CIDE家族的基因研究已经很多了，CIDE家族的基因是Fsp27在人中的同源物^【4】，其主要分布在小肠、心脏、结肠和胃中，在脑、肾脏和肝中低表达，但是,它并不是脂肪特异性基因^【5】。

王淑芳等人提取人腹部皮下白色脂肪组织的总RNA，经RT-PCR获得CIDE家族的三个基因的全长基因，克隆入真核表达载体最终验证了CIDE家族的三个基因可诱导细胞发生凋亡的生物学作用，为进一步研究CIDE家族的三个基因的生物学功能奠定了坚实基础^【6】。

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