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摘 要

测定小麦叶绿素含量不仅关系到小麦的营养诊断，同时也为高产优质的小麦生产提供科学依据。因而小麦叶绿素测量显得至关重要，但在具体试验操作过程中容易忽视细节问题，故需对测量进行一定改进。试验得来在进行大量样品叶绿素含量测定时，短时间内光照对待测定样品叶绿素含量不影响，叶片不同部位的叶绿素含量差异显著，故需按照同一部位取样，叶绿素提取时间以45h最佳。

关键词:叶绿素含量，时间，取样部位，光照

Abstract:The content of wheat Chlorophyll determination is not only related to the nutrition diagnosis, but aslo provide a scientific basis for the high quality and production of wheat. So Chlorophyll extraction becames very important. However, it is easy to overlook the details during all the measurement. so we must carry on some improvements of the measurement. During a large number of Chlorophyll sample determination in the operation, Illumination has no effect on the content of Chlorophyll in a short time, the differences between blades are very significant, so sampling should take in accordance with same position, the best time of Chlorophyll extraction is 45h.

Keywords: The content of Chlorophyll, Time, Sampling Position , Illumination

目录

1 前言 4

2 试验材料与方法 6

2.1 试验材料 6

2.2试剂与仪器 7

2.3测定方法 7

2.3.1取样与处理 7

2.3.2叶绿素含量测定 7

2.3.3不同浸提时间的叶绿素含量测定 8

2.3.4叶片不同部位的叶绿素含量测定 8

2.3.5浸提液光照处理下的叶绿素含量测定 8

3 结果与分析 8

3.1不同提取时间对叶绿素含量测定影响 8

3.2叶片不同部位对叶绿素含量测定影响 10

3.3浸提液光照处理下对叶绿素含量测定影响 12

结论 14

参考文献 15

致谢 16

1 前言

小麦是世界上总产量第二的粮食作物，其仅次于玉米，小麦生产不仅对中国乃至全世界的稳定和发展都起着重要的作用。从播种期到乳熟期，小麦整个生长发育过程中，氮元素是小麦生长发育的关键元素，同时氮也是构成小麦叶绿素的主要元素，结合小麦自身生长环境条件，如光照强度、温度、湿度、盐度等^[1]，科学施肥对小麦自身的不同优秀品种和生产产量有着极大影响。一般来说，叶片的颜色越深，叶绿素的浓度大，小麦的氮含量也越高。小麦细胞中的细胞质、细胞核和酶的构成都离不开氮。缺乏氮元素，在叶片上表现的尤为明显，小麦矮小瘦弱，叶片发黄枯萎。因而氮含量是合理施肥的重要指标^[2]，又因氮含量构成叶绿素密切相关，所以测定小麦叶绿素含量为研究小麦生理特性，逐步发掘小麦不同优秀品种和生产产量提供了基础的科学实验依据^[3]。

小麦的叶片是进行光合作用的主要场所，同时也是小麦进行营养物质积累的主要器官。小麦的叶绿素将环境中的水分及二氧化碳通过光合反应，将无机物转化成有机物，也是将光能转化成化学能的过程，因此小麦叶片中的叶绿素含量与光合作用密切相关^[4]。小麦叶片中的叶绿素与类胡萝卜素是参与光合作用的主要色素，叶绿素又可以分为叶绿素a和叶绿素b，它们都是高等绿色植物的重要组成成分。约占植物自身总叶绿体色素含量的75%。而符合光合生理下生长的植物通常叶绿素a与叶绿素b比值约为3倍。用层析液吸取研磨溶液并随之在滤纸上扩散开来可以发现叶绿素a为蓝绿色，叶绿素b为黄绿色。叶绿素吸收光能，在光合作用中伴随着光的能量转移，少量的叶绿体色素a还参与光能的转换。所以叶绿素的含量同叶绿素光合作用相关，随着小麦生长，叶绿素含量的积累，光合作用的速率也随之增加，从而影响小麦自身的品质与产量。此外，叶绿素含量的多少，是小麦自身真实生长状态的反映。一些环境因素，比方说干旱未雨、土地盐度影响、冻害、大气污染、施肥不及时导致元素的缺乏等等复杂因素的存在都会影响到叶a与叶b的含量,因此测定叶a与叶b对植物的光合生理与逆光生理的研究具有重要意义^[5]。

小麦叶绿素含量的多少决定了光能利用率的高低，小麦对田地中养分的变化十分敏感，实验证明为了获得高产、优质的小麦，生产上通过将小麦叶片叶绿素的含量变化引起的叶色变化作为营养管理、小麦氮素营养状况追踪和科学施肥判断的重要指标^[6]。即在一定程度上，小麦叶片叶绿素含量可以反映整个小麦生长发育过程中的营养状况，所以研究小麦叶片的叶绿素的含量对于小麦的产量和品质显得十分重要。研究叶绿素含量以及对于实验中叶绿素怎样提取更快捷、方便、可靠也成为研究人员的重要课题。

叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素、叶黄素不溶于水但可溶于乙醇，丙酮等有机溶剂，因而可用有机溶剂对叶绿素进行提取。测量植物叶绿素含量的方法可分为分光光度计和活体叶绿素仪法两大类^[7]，其中被广泛运用的是分光光度计法，也被称作Arnon法，其原理是利用叶绿素溶解于有机溶剂的特性，将叶片在80%丙酮溶液中研磨提取，经过过滤或离心之后，在特定的波长下测定叶绿素液的光密度，再根据经验公式对叶绿素的含量进行计算。但是该方法在实际的操作试验中，不仅步骤多而且耗费工时，在光照条件下无法避免叶绿素分解带来测量的误差，特别强调的是对于大田试验中大量样品的测定十分困难^[8]。Hiscoxamp;Isrealstan用二甲基吕素亚砜（DMSO法）直接对叶绿素进行提取^[7]，相比于之前的Arnon法更加简便快速，但是提取的温度过高，非常温下对叶绿素有损，DMSO法的吸收光谱与Arnon法不同，用经验公式来计算会带来误差，且DMSO对人体有一定的毒害，所以不能延续使用^[9]。但是此方法的思路却得到重视，陈福明和陈顺伟^[10]等对不同配比的乙醇、丙酮、水以及三者之间的混合溶液对叶绿素的提取效果进行了详细研究分析，得出了混合液提取叶绿素的可行性。洪法水等^[11]研究表明：乙醇与丙酮的混合液提取叶绿素存在增效作用，且乙醇与丙酮在等摩尔混合提取叶绿素效果最佳。笔者在前人的基础实验上筛选分析并得到快速简便测量叶绿素含量提取方法，从大田采取的小麦的叶片，实验室可用叶绿素分光光度计测量仪器出发，为准确测量冬小麦叶绿素的含量提供坚实可靠的科学依据^[12]。

根据现有的可见光谱被叶绿素提取液所吸收，即利用分光光度计测定提取液在某一波长的吸光度，并用公式计算出提取液中叶绿素的含量。这种方法的依据是根据朗伯—比尔定律，叶绿素提取液的溶质浓度C与吸光度A和提取液厚度L成正比。小麦叶绿素的提取液在特定波长下的吸光系数，可通过测定已知浓度的叶绿素提取物质在不同波长下的吸光度而求得。如果提取溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于个组分在相应波长下吸光度的总和，这就是对提取液所固有的吸光度的累加。本试验测定叶绿素提取液中叶绿素a、b的含量，只需测定该提取液在649nm、665nm、两处特定波长下的吸光度，并根据经验公式即可求出其浓度。

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