拮抗菌S9在植物根围定植量的研究

论文总字数：8017字

摘 要

青枯菌(Ralstonia solanacearum)是一种能够引起植物青枯病的土传病原微生物。生产上因缺乏抗病品种和有效农药，防治十分困难。本研究通过分离、纯化、诱导，获得纯的枯草芽孢杆菌S9，利福平和链霉素抗生素标记后，回收测量其在植物根围定植数量约为7.11E 04 至 5.08E 05之间，研究该突变菌对番茄青枯病的影响。结果显示，芽孢杆菌S9对于青枯菌T13具有一定抑制作用。

关键词：番茄青枯病，生物防治, 枯草芽孢杆菌

Abstract: Bacterial wilt is a kind of disease caused by soil-borne plant pathogenic micro-organisms.In the process of production,it is very difficult to prevent and treat, because of the lack of disease-resistant varieties and effective pesticide. The experiment through isolation, purification, induction, to obtain pure mutant bacteria Bacillus S9 .We userifampicin and streptomycin to mark the bacteria. After measure and obtain the number（approximately7.11E 04 to 5.08E 05）in plant rhizosphere engraftment And plant disease situationto explore the mutation of bacteria on the impact of bacterial wilt of tomato.The result shows that,the bacteria Bacillus S9 has certain negative influence to the Ralstonia solanacearum T13.

Keywords: Ralstonia solanacearum，biological Control，Bacillus subtilis

目 录

1 前言……………………………………………………………………………4

2.材料与方法……………………………………………………………………5

2.1 实验材料……………………………………………………………………5

2.2 实验方法……………………………………………………………………5

2.2.1栽种番茄…………………………………………………………………6

2.2.2配制培养基………………………………………………………………6

2.2.3病菌的纯化与培养………………………………………………………6

2.2.4 生防菌S9的培养与筛选………………………………………………6

2.2.5定植实验操作……………………………………………………………7

2.2.6 结果观察分析……………………………………………………………7

结论………………………………………………………………………………9

参考文献…………………………………………………………………………10

致谢………………………………………………………………………………11

1 前言

番茄细菌性青枯病是由番茄青枯病菌（Ralstonia solanacearum）所引起的一种重要土传病害^[1]，分布范围较广，普遍发生在热带和亚热带地区，常造成毁灭性的灾害，严重影响了蔬菜生产^[2]。发病植物茎叶萎蔫下垂直至全部枯死，是世界上分布最广、危害最大、造成损失最严重的植物病害之一^[3]。植物青枯菌（R. solanacearum）可侵染50多个科200多种植物，仅次于农杆菌（Agrobacterium tumerfaciens），是番茄、马铃薯、花生、甘薯、烟草、辣椒、茄子、生姜、草莓、香蕉以及一些贵重药材和花卉植物许多植物生产的重要限制因素^[4]，世界各地均有分布。由于该病菌的菌系复杂，寄主广泛，青枯病的防治工作一直以来都是个难题。

病原细菌变异复杂，寄主范围广，化学防治效果不明显，这使得青枯病的防治变得十分困难。抗病品种的使用是最简单和有效的防治措施，但是由于青枯菌生理小种的多样性，病菌的变异以及品种与环境的互作等多种原因，品种的抗性表现不稳定。因此稳定并提高寄主植物的抗性是综合防治青枯病最可行的一种方法。相对于化学杀菌剂，生物防治手段提供了一种对环境友好并且有效的方法来控制植物病害。

细菌因庞大的种群、高繁殖力、复杂的代谢活动、对病原物的作用方式多样、易于人工培养，在自然发生的生物防治和人类应用生物防治的活动中，拮抗细菌及其代谢产物都起到了重要作用。目前，应用较多的生防细菌主要有芽孢杆菌（Bacillus spp.）、假单胞杆菌（Pseudomonas spp.）、土壤放射杆菌（Agrobacterium radiobacter）等^[5] 。而芽孢杆菌（Bacillus spp.）是目前生防细菌中研究较多的一类，因其能够产生耐热、耐旱、抗紫外线和有机溶剂的内生孢子，所以是理想的生防菌筛选对象。

利用有益微生物防治植物病害始于1921年Hartely利用拮抗真菌防治猝倒病(Pythium debaryanum ,damping-off)^[6]，1973年澳大利亚植物病理学家 Kerr 利用放射土壤杆菌（Agrobacterium radiobacter K84）成功防治植物根癌病，极大地促进了人们对生物防治植物病害的兴趣。从理论上讲任何能够降低植物病原微生物数量或致病性的微生物都具有生防潜能，因此，植物病害生防微生物涉及真菌、放线菌、细菌乃至病毒（噬菌体）等很多种群。自Kloepper等人1978年提出植物根围促生菌（Plant grow-promoting rhizabacteria PGPR）以来，PGPR迅速成为植物病害生物防治的一大热点^[7]。由于根围是抵抗土传病害病原菌侵染的锋线，病原菌对根的初次和再次侵染的过程当中均要受到来自根围微生物的拮抗作用^[8]。已报道的具有生物防治作用的PGPR分布于多个属内，其中主要有固氮菌属（Azotobacter）、肠杆菌属（Enterobacter）、节杆菌属（Arthrobacter）、文氏菌属（Erwinia）、芽孢杆菌属（Bacillus）、欧假单胞菌属(Pseudomonas)^[9]。

迄今为止，关于植物青枯病生物防治的报道已经多，生防因子也越来越宽泛，目前研究的热点仍然主要集中在无致病力的青枯劳尔氏菌内生细菌和根围促生菌这三大类[4]。在青枯病的生物防治中，研究较多的主要是芽孢杆菌、链霉菌以及假单胞菌[2]。此次实验我们主要是得到已经分离、纯化的枯草芽孢杆菌S9来诱导获得具有活性的S9菌株，与青枯菌T13在土壤环境条件下接种在番茄植株上的颉颃实验的反应来判断生防菌S9对番茄青枯病菌有无产生防病及促生效果，并对其定植菌量进行计数。

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