褐蘑菇与双孢菇多糖提取及抗氧化活性研究

论文总字数：9496字

摘 要

预先准备好双孢蘑菇粉末和褐蘑菇粉末，利用热水浸提法和乙醇沉淀法提取两种蘑菇粉末中的粗多糖，然后采取sevage法去除粗多糖中的蛋白质，进一步得到精多糖。多糖的质量浓度可以通过预先测定出来的葡萄糖标准曲线进行计算，即计算出葡萄糖溶液的线性回归方程，然后测出多糖溶液的吸光值，进一步计算出该多糖溶液的质量浓度。最后分别从清除超氧阴离子自由基的能力和清除DPPH自由基能力的测定两方面进行研究探讨双孢蘑菇跟褐蘑菇的抗氧化性。结果表明：双孢蘑菇跟褐蘑菇多糖都具有一定的抗氧化性，且抗氧化活性随着多糖溶液浓度的增大而增强。双孢蘑菇其多糖成分的清除DPPH自由基能力跟清除超氧阴离子自由基的能力优于褐蘑菇其多糖成分。

关键词：双孢蘑菇，褐蘑菇，多糖，提取，抗氧化活性

Abstract：Hot water extraction way and ethanol precipitation method were used to isolated from agaricus mushroom powder and brown mushroom powder. The concentration of polysaccharides was calculated by the standard curve. Finally, separately from the superoxide anion radical scavenging activity and DPPH free radical scavenging activity was measured in two aspects of research antioxidant with agaricus mushroom and brown mushroom. The results show that: the polysaccharide of agaricus mushroom and brown mushroom all have some antioxidant activity, and the antioxidant activity increases with increasing polysaccharide solution. Agaricus mushroom polysaccharide component of DPPH free radical scavenging activity and superoxide anion radical scavenging ability than the brown mushroom polysaccharide composition.

Keywords：agaricus mushroom, brown mushroom , polysaccharide, extraction, antioxidant activity

目录

1 绪论 4

2 材料和实验方法 6

2.1 材料 6

2.1.1 仪器 6

2.1.2 实验原料 6

2.1.3 试剂 6

2.2 试验方法 6

2.2.1 多糖提取物的制备 7

2.2.2 粗多糖中蛋白质的去除 7

2.2.3 多糖的质量浓度的测定 7

2.2.4清除超氧阴离子自由基(O₂^- ·)的分析方法 7

2. 2.5清除DPPH自由基能力的测定分析方法 8

3 结果与分析 8

3.1 结果 8

3.1.1 葡萄糖的标准曲线及多糖的提取率 8

3.1.2多糖清除DPPH自由基的能力 8

结论 10

参考文献 11

致谢 13

1 绪论

双孢蘑菇和褐蘑菇是同一个属即蘑菇属，但不是同一个品种，褐蘑菇属于双孢菇，是欧美市场畅销的食用菌名贵品种，国内不多见，褐蘑菇多糖具有降血糖功能^[1]。生物体内在新陈代谢的过程中会不断地产生自由基,当它的存在超出机体防护系统所具有的清除能力时,就会直接或间接的引起蛋白质的变性、酶的失活、多糖的降解、DNA链的断裂、生物膜结构的损伤、细胞解体乃至机体病变和死亡。研究发现,许多天然食品都具有清除自由基和抗氧化的能力^[2]。本实验所取的双孢蘑菇和褐蘑菇中,多糖是其主要生物活性物质,但目前国内外对其保健功能的研究尚未见报道,实验中对双孢蘑菇，褐蘑菇多糖提取及抗氧化活性进行研究,旨在为双孢蘑菇和褐蘑菇的开发利用提供参考依据。多糖是各种植物中的重要的有效成分,具有抗肿瘤、抗氧化损伤、抗癌抗菌、抗炎症等多种生物活性作用。植物多糖含量的测定也对植物资源得开发利用,尤其是中草药产业的发展提供了一定的技术支持,在药物和食品加工业具有更为重要的意义^[3]。此外，随着科研的不断深入,植物多糖的含量测定方法也越来越多,抗氧化活性的测定也随之越来越多。

人体内有氧代谢会不断地产生自由基，当它的存在超出人体自身的抗氧化防御系统清除能力时，就会导致高血压、糖尿病、痴呆症等一系列疾病。由于人工合成的抗氧化剂具有一定的毒性，必然会破坏人类的身心健康，而植物多糖作为一种重要的生理活性物质，研究它的体外抗氧化能力，将其开发成为无毒、高效的天然抗氧化剂将是解决这一问题的有效途径^[4]。因此，本论文就尝试对双孢蘑菇跟褐蘑菇中多糖成分进行抗氧化活性进行探讨研究。

下面就简单介绍下双孢蘑菇的特性：蘑菇的实体中等偏大，菌盖宽5-10cm，初半球形，后平展，白色，光滑，稍微有点干就会变成黄色，它的边缘在初期稍微有点向内卷曲。蘑菇肉偏白色，厚，受伤后稍微有点偏于淡红色，拥有蘑菇特有的一种气味。生林地、草地、田野、公园、道旁等肥分充足处,广泛分布于整个北温带,生长季节夏末秋。分布极广泛，国内普遍栽培。可食用，味道鲜美，我国大批制做罐头行销国内外。该蘑菇蛋白质含量高达42%（干重），氨基酸的种类十分丰富，核苷酸和维生素也很丰富。尚可药用及工业用。其中含多量酪氨酸酶，对降低血压十分有效。还可以制成肺炎辅助治疗剂——健肝片。有的国家还发现含有抗癌物质和抗细菌的广谱抗菌素。近年来由于深层培养的研究成功，人们还可利用蘑菇菌丝体生产蛋白质、草酸和菌糖等物质。

褐蘑菇的特性：褐蘑菇盖大柄粗、菌肉肥厚、味道鲜美,是欧美、日本、新加坡等国家和地区畅销食用菌品种之一,跟双孢蘑菇差不多，具有较高的食用和药用价值,褐蘑菇多糖是其主要有效成分之一。经研究表明,褐蘑菇多糖也具有抗辐射、抗肿瘤、抗突变、增强免疫力、抗氧化、降血压、降血脂、抗病毒及健胃保肝等功效,在食品、药品及保健品这些行业上有着很大范围的应用前景^[5-7]。褐蘑菇的栽培技术特别简单、生长的周期也较为偏短，是需要大量劳动力来生产的产业,其生产需要消耗的资金不多,成为广大创业者跟农民工增加收入的一项新兴产业。然而它的出口产品主要以新鲜的褐蘑菇为主,在生产加工制作过程中会不断的产生些菌柄、菌盖、畸形菇、残次菇等下脚料,很少的则以廉价进入市场或制作为干菇,大量的以垃圾的形式被丢弃,这样既污染了环境又浪费了资源,而其有效成分却未得到充分的利用^[8]。

近年来，随着分子生物学和医学的不断发展,人们逐渐认识到,自由基在一定外界环境下对机体的各个方面都会产生一定的影响,而适当的给予一些外源性的抗氧化剂或者添加其一定水平的药物，这些药物可以将机体的一些内源性的抗氧化物质变成原样,可以将这种状况改善过来^[9]。在很低的浓度下能够有效的缓解或者是阻止底物发生一些氧化的物质称为抗氧化剂^[10]。像脂质、蛋白质、糖和DNA都称为是被氧化的底物^[11]。天然的抗氧化剂具有如下优点：没有毒副作用、没有任何的残留、没有污染、很稳定、比较安全。因为这些原因，受到越来越多的人们的关注。在医药学、保健与功能食品、美容养颜护肤等领域，天然的抗氧化物质的研究都有一定非常重要的意义^[12]。据相关报道表明，有些天然的植物具有很明显的抗氧化活性，因此，寻找效果好的，天然的抗氧化植物资源是非常必要的。活性比较高的植物的筛选是一项比较新的技术,在寻找活性成分等方面起着非常重要的作用。研究表明,自由基与机体的许多功能性障碍都和疾病的发生密切相关^[13]。因此，研究自由基的检测方法并探讨物质对自由基的清除作用具有重要的意义。我们根据文献调研,对简便的DPPH·分析法进行了初步研究,并应用该法对若干野生植物进行了DPPH·清除实验^[14]。结果表明,该法简便易行,灵敏可靠,是筛选天然产物抗氧化剂的好方法之一。自由基是指具有未配对价电子的原子、原子团或分子。大多数自由基的化学性质特别活跃,寿命极短。但是也有少数的自由基的化学性质特别稳定,即便在室内温度下的溶液中也比较安定，DPPH·就是其中的一个很好的说明。它的稳定性大多数来自共振的稳定作用以及三个苯环间的空间障碍,而使夹在其中间氮原子上的不成对电子无法发挥其固有的电子成对作用。1958年,Blois将其应用于抗氧化剂的筛选研究。此后,国外又有很多学者用此法研究了物质清除自由基的性质^[15-17]。然而,这种简便可靠的自由基分光分析法在国内却很少有报道。广义的抗氧化剂则指自由基及其活性氧的清除剂、阻断剂及修复剂等物质的总称。DPPH·实验给我们提供了一个试样与稳定自由基反应的信息,故可将此法应用于自由基清除剂的筛选研究工作。DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其醇溶液呈深紫色,具有单一电子,故能够接受一个电子或是氢离子,在波长为514 nm下拥有最大的光吸收值。当存在自由基清除剂时，DPPH自由基的单电子就会被捕捉到促使其颜色变的浅一点,而在最大的光吸收波长下的吸光值下降,且下降的程度呈一定的线性关系,再者以试验的样品来评定抗氧化能力^[19]。该抗氧化的能力是用清除率来表示的,清除率越大,说明其抗氧化的能力就越强。DPPH自由基法是用来评价天然的抗氧化剂和抗氧化活性的一种快速、简单、高灵敏度的一种方法^[20]。

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