1,2,4,6-Tetragalloyl glucose 致结肠癌细胞凋亡分子机理的研究

论文总字数：15598字

摘 要

：目的 探讨1,2,4,6-Tetragalloyl glucose (1,2,4,6-四没食子酰葡萄糖) 致人类结肠癌细胞的凋亡的分子机理，及其致细胞凋亡的所采用的凋亡途径。方法 用四甲基偶氮唑蓝(MTT) 比色法评价细胞生长情况，DAPI染色后用激光扫描共焦显微镜观察细胞。Annexin V-FITC染色测定凋亡率并用流式细胞仪进行分析。用Western印迹分析检测BAX和Bcl-2 MAPKs的表达，并用迷你BIS图像分析系统观测。用SPSS软件对得到的数据进行分析。结果 抑制细胞增殖和通过触发线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡。

关键词：1,2,4,6-Tetragalloyl glucose 凋亡 线粒体途径

Abstract: Purpose We explore the mechanisms of 1,2,4,6-Tetragalloyl glucose induced apoptosis in colon cancer cells. Method: The cell viability was evaluated by 3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide (MTT) assay; ROS level in cells were determined by DHCA-DA by flow cytometry. Moreover, the MAPKs (JNK, p38, and ERK) were evaluated by western blot. All analyses were performed using SPSS. Result: 1,2,4,6-Tetragalloyl glucose inhibited human colon cell growth in ROS-dependent way.

Keyword: 1,2,4,6-Tetragalloyl glucose apoptosis Mitochondrial pathway

目录

1、前言 4

1.1 结肠癌的简单介绍 4

1.2 结肠癌的治疗方法 5

1.3 核桃的来源 6

1.4 核桃青皮 6

1.5 1,2,4,6-Tetragalloyl glucose的分子式 7

2、材料方法 7

2.1 药品与仪器 7

2.1.1化学药品 7

2.1.2仪器 8

2.2 细胞株和细胞培养 8

2.3 1,2,4,6-Tetragalloyl glucose 对于HT-29细胞抗增殖作用 8

2.4 光学显微镜检查 8

2.5 DAPI染色 8

2.6 Annexin V-FITC染色测定凋亡率 9

2.7 活性氧(ROS) 水平的测定 9

2.8 半定量逆转录-聚合酶链反应 (RT-PCR) 9

2.9 Western印迹分析 10

2.10 统计分析 10

3 结果 10

3.1 1,2,4,6-Tetragalloyl glucose 抑制 HT-29 细胞增殖 10

3.2 1,2,4,6-Tetragalloyl glucose 通过触发线粒体凋亡途径诱导细胞死亡 11

3.3 1,2,4,6-Tetragalloyl glucose 对 MAPK 磷酸化和 Akt 信号转导的影响 11

4 讨论 12

结论 14

参考文献： 15

致谢 17

1、前言

1.1 结肠癌的简单介绍

恶性肿瘤就是人们所说的癌症，它是100多种相关疾病的统称。当身体内细胞发生突变后，它会不断地分裂，不受身体控制，最后形成癌症。是当今世界上威胁人类身心健康的重要疾病之一，是仅次于心血管疾病的人类第二大“杀手”，根据世界卫生组织报告，每年全世界死于癌症的患者约700万左右，预计未来10年癌症的发病率与死亡率仍将继续攀升^[1]，而且癌症的治疗费用比较高昂，给患者及其家庭带来了痛苦和沉重的经济负担,对于家庭和社会都有着极大的危害。

而结肠癌是西欧、北美等发达国家最常见的恶性肿瘤，是世界顺位第三的恶性肿瘤，也是我国九大常见恶性肿瘤之一。结肠癌在过去的几十年间，包括我国在内的多数国家和地区的结肠癌的发病率在逐渐呈上升趋势。在我国，因结肠癌而死亡的患者，男性居第5位，女性居第6位。从流行病学的观点看，结肠癌的发病与社会环境、生活方式(尤其是饮食习惯、缺乏体力活动)、遗传因素有关。年龄、结直肠息肉史、溃疡性结肠炎及胆囊切除史也是结肠癌的高危因素。有研究结果显示结肠癌的发病年龄在我国以中老年为主，而且发病的高峰年龄均在40～60岁；美国人的平均年龄为70岁。

结肠癌的好发部位为直肠与乙状结肠交界处，结肠癌患者的症状常表现为以下几个症状腹痛及消化道激惹症状：多数病人在此阶段有不同程度的腹痛及腹部不适。进食后症状常加重，有时伴有间歇性腹泻或便秘。结肠肝曲癌可表现为右上腹阵发性绞痛，类似慢性胆囊炎。一般认为，右半结肠癌疼痛常反射至脐上部；左半结肠癌疼痛常反射至脐下部。如癌瘤穿透肠壁引起局部炎性粘连，或在慢性穿孔之后形成局部脓肿时，疼痛部位即为癌肿所在的部位。腹部肿块：一般肿块形状不规则，质地比较硬，表面呈结节状。横结肠和乙状结肠癌早期有一定的活动度及轻压痛。升、降结肠癌如已穿透肠壁与周围脏器粘连，慢性穿孔形成脓肿或穿破邻近脏器形成内瘘时，肿块多固定不动，边缘不清楚，压痛明显。排便习惯及粪便性状改变：为癌肿坏死形成溃疡及继发感染的结果。因毒素刺激结肠产生排便习惯改变，排便次数增加或减少，有时腹泻与便秘交替出现，排便前可有腹部绞痛，便后缓解。粪便常不成形，混有黏液、脓血，有时含血量较大常被误诊为痢疾、肠炎、痔出血等。贫血及慢性毒素吸收症状：癌肿表面坏死形成溃疡可有持续性小量渗血，血与粪便混合不易引起病人注意。但可因慢性失血，毒素吸收及营养不良而出现贫血、消瘦、无力及体重减轻。晚期病人有水肿、肝大、腹水、低蛋白血症、恶病质等现象。肠梗阻和肠穿孔：因肠腔内肿块填塞、肠管本身绞窄或肠腔外粘连、压迫所致。多表现为进展缓慢的不完全性肠梗阻。梗阻的早期病人可有慢性腹痛伴腹胀、便秘，但仍能进食，食后症状较重。经过较长时间的反复发作之后梗阻渐趋于完全性。有些病人以急性肠梗阻的形式出现，在老年人的急性结肠梗阻中约半数以上由结肠癌所引起。

现在的结肠癌的治疗方法是以手术为主、辅助以化学治疗但是由于原发性（或继发性）耐药性，术后五年的存活率在40%左右，效果不是很理想。

1.2 结肠癌的治疗方法

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