石榴籽油成分分析及体外消除体外消除自由基能力的研究

论文总字数：9874字

摘 要

本实验将萃取好的石榴（Punica granatum L.)籽油用气相色谱-质谱仪对石榴籽油的化学成分进行了分析。GC-MS分析的结果显示，石榴籽油的主要成分是脂肪酸。以还原型辅酶I-吩嗪硫酸甲酯-氮蓝四唑系统产生超氧阴离子自由基和羟基自由基诱导DNA及蛋白质氧化损伤为模型，考察石榴籽油对超氧阴离子自由基的清除能力以及对DNA和蛋白质氧化损伤的保护作用.结果表明：石榴籽油清除自由基的能力、对DNA和蛋白质损伤的保护作用随着石榴籽油浓度的升高而增强。所以石榴籽油在体外具有清除自由基、减轻羟基自由基诱导DNA及蛋白质氧化损伤的作用。

关键词：石榴籽油，自由基，过氧化氢（H₂O₂）

Abstract: Compositions of the extraction oil from Pomegranate (Punica granatum L.) seed was analysis by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). Compositions of the oils was identified by GC-MS and the main composition was fatty acid. We evaluated the free radical scavening activities and protective effect of pomegranate seeds oil. In this study, we examined superoxide anion radical scavenging activity in PMS-NADH-NBT system and protective ability of DNA damage and protein oxidation. Pomegranate seeds oil showed a dose-dependent on superoxide anion radical scavenging activity DNA damage protection and protein oxidation protection. Pomegranate seeds oil can scaveng superoxide anion radical, alleviate DNA and protein damage in Fenton system.

Keywords：Pomegranate seeds oil, free radical, H₂O₂

目录

1 前言 3

2 材料与方法 5

2.1 材料与试剂 5

2.2 实验方法 5

2.2.1 超氧阴离子自由基清除能力 5

2.2.2 蛋白质损伤保护作用 6

2.2.3 DNA损伤保护作用 6

3 结果与分析 6

3.1 石榴籽油的化学成分分析 6

3.2不同类型的自由基的产生机理 7

3.3 对超氧阴离子自由基清除能力的测定 7

3.4 对蛋白质损伤保护作用能力的测定 8

3.5 对DNA损伤保护作用能力的测定 9

结论 10

参 考 文 献 11

致 谢 13

1 前言

石榴（Punica granatum L.)是石榴科石榴属的落叶灌木或小乔木，主要分布在亚热带及温带地区，是人类引种栽培的最早的果树和花木之一。石榴不仅可以被当做新鲜水果食用,而且石榴的各个部分经常作为中草药配方。石榴具有较高的营养价值：含有18种氨基酸,如色氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸等,具有抗胃酸过多、生津化食、止泻、软化血管、降温、解毒等多种功能。石榴的种植面积近年来在不断扩大,以石榴为原料的加工产业也在迅速的发展,所以近年来对石榴籽的开发利用也越来越迫切。

近年来研究表明，石榴不仅具有药理学的作用，而且石榴的果汁、果籽、果皮、花等均起到很好的保健和食疗作用。例如，抗菌作用，比如对金黄色葡萄球菌，大肠杆菌等的抑制作用；抗病毒作用，比如，石榴汁具有抑制和杀灭人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的活性,可以作为局部杀菌剂的备用资源^[1]。对消化系统作用，比如，石榴皮碱可以作为驱虫的主要有效成分, 对绦虫的杀灭作用极强。抗肿瘤作用，比如抗乳腺癌、抗结肠癌、抗肺癌作用等。除此之外，石榴汁中还含有多种氨基酸和微量元素，有助消化、抗胃溃疡、软化血管、降血脂和血糖，降低胆固醇等多种功能^[2]。石榴花则可以用于治疗中耳炎和糖尿病等症^[3]。所以，石榴各个部分的化学成分和药理作用的研究越来越受到人们的重视。

由于人们对于石榴籽研究工作的不足,以及人们对石榴籽的利用价值缺乏认识,石榴在加工后剩余大量的种子得不到合理的利用,常作为废料被遗弃,造成了资源的浪费。近年来关于石榴籽的研究日益增多，据文献报道，干燥石榴中含有14%～27%的石榴籽油，含量极其丰富^[4]。石榴籽中还含有没食子酸、黄酮、胡萝卜苷和乌索酸等活性物质。石榴籽油中也富含多种有效成分，比如不饱和脂肪酸、甾类化合物、磷脂、甘油三酯及挥发油。其中，不饱和脂肪酸的相对含量就占到92.22%。脂肪酸，具有较强的抗氧化能力,从而可以用来抵抗人体炎症和氧自由基的破坏等作用^[5]。而石榴籽油中最主要的脂肪酸是石榴酸。石榴酸及其共轭三烯异构体具有极强的氧化能力,可以较有效的抵抗炎症和氧自由基的破坏作用,具有延缓衰老、预防动脉粥样硬化等作用^[6]。除此之外，石榴籽蛋白质中氨基酸组成较完全；其中，人体所需的必需氨基酸含量为31.98%^[7]，如色氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸等，具有生津化食、抗胃酸过多、软化血管、止泻、解毒、降温等多种功能^[8]。

随着自由基科学理论研究的不断发展,氧化损伤已被人们认为是引起人体衰老、心血管疾病等疾病最主要的因素之一^[9]。因此,从天然资源中筛选出具有较好抗氧化能力的品种，已成为当今生物学、食品科学等领域中的一个新发展趋势。而占石榴果实总重12.54%的石榴籽则成为了不二之选。Kaufman等人报道,石榴籽油中石榴酸含量为64%～83%,一种18碳3烯酸，具有防治高血脂症、心脑血管疾病抗肿瘤等效应^[10]。石榴籽油含有大量的共轭亚麻酸(ＣＬＮＡ,约31.8%～86.6%),其次是油酸(0.4%～17.7%)、亚油酸(0.7% ～24.4%)、棕榈酸(0.3%～9.9%)和硬脂酸(2.8%～16.7%),不同品种石榴籽油中的脂肪酸成分含量有差异。此外，国外近年的研究表明，石榴籽油还具有延缓衰老、提高免疫力、防癌抗癌、保护心血管等功效以及具有明显的抗氧化及抗癌活性、延缓衰老、抗乳腺癌和皮肤癌的药用潜能。除此之外，研究表明,石榴籽油中含有雌二醇(estradiol)和雌酮(estrone)。以色列研究人员发现,石榴不仅对乳癌有治疗作用,并且可能是一种安全的雌激素代替疗法。目前市面上的石榴籽油主要用于护肤品以及灌制成软胶囊并且作为食品补充剂使用。在欧美市场上有一定的认可度。为更好地开发石榴籽资源，本文经正丁烷常温加压萃取得毛油，再经过低温冷冻脱蜡得到的成品油经过GC-MS技术对石榴籽油成分进行了系统性的分析研究，为进一步合理开发利用提供科学依据。除此之外，本工作还主要探究石榴籽油对自由基的清除能力以及对蛋白质、DNA损伤的保护作用,为进一步开发利用石榴籽油提供有力的实验依据。

2 材料与方法

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