石榴籽油对H2O2诱导PC12细胞损伤的保护作用

论文总字数：12420字

摘 要

通过建立H₂O₂诱导PC12细胞损伤氧化应激损伤模型，采用甲氮甲唑蓝（MTT）法检测细胞存活率和细胞损伤程度，硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA) 含量，超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化氢酶(Cat)试剂盒测定细胞的氧化应激变化，考察不同浓度石榴籽油对H₂O₂刺激的PC12细胞中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活力及丙二醛含量的影响。结果表明：石榴籽油在0.5～4 mg/mL浓度范围内能显著提高H₂O₂损伤的PC12细胞存活率，显著减少H₂O₂刺激的PC12细胞中MDA的生成，提高SOD活力及Cat活性。所以石榴籽油在体外具有保护PC12细胞对抗氧化损伤的作用。

关键词：石榴籽油；自由基；过氧化氢（H₂O₂）；PC12细胞

Abstract: We based on the model of cell death damge induced by H₂O₂, MTT method was employed to determine the cell viability. Thereafter, the mount of MDA and activities of superoxide dismutase and catalase were determined by commercial kits.

In addition, pretreatment of PC12 cells with pomegranate seeds oil prior to H₂O₂ exposure elevated cell viability, enhanced activity of superoxide dismutase and catalase, and decreased levels of malondialdehyde. Pomegranate seeds oil can protect PC12 cell against H₂O₂ induced damage via enhancement of intracellular antioxidant enzyme activity．

Key words: Pomegranate seeds oil; free radical; H₂O₂; PC12 cells

目录

1 前言 4

1.1 石榴籽油的化学成分 4

1.2 石榴籽油的药理作用 5

1.2.1 免疫调节作用 5

1.2.2 抗氧化作用 5

1.2.3 抗癌作用 5

1.2.4 保护心血管作用 6

1.2.5 其它作用 6

2 材料与方法 6

2.1 试剂与仪器 6

2.1.1 主要药品与试剂 6

2.1.2 主要仪器 7

2.2 试剂和药品的配制 7

2.2.1 石榴籽油的制备 7

2.2.2 磷酸盐缓冲溶液(PBS)的配制 7

2.2.3 H₂0₂的配制 7

2.3 PCI2细胞的培养、传代及冻存 7

2.3.1 细胞培养 7

2.3.2 细胞传代 7

2.3.3 细胞冻存 8

3 实验方法 8

3.1 PC12细胞培养 8

3.2 对PC12细胞生长的影响 8

3.3 对氧化应激的PC12细胞中抗氧化能力的影响 8

4 结果与分析 9

4.1 对PC12细胞生长的影响 9

4.2 对过氧化氢损伤的PC12细胞生长率的影响 9

4.3 对过氧化氢损伤的PC12细胞中SOD、MDA 含量及Cat的影响 10

结 论 12

参考文献 13

致 谢 16

1 前言

石榴（Punica granatum L.)为石榴科石榴属落叶灌木或小乔木，原产于地中海至非洲西部地区，主要分布于亚热带及温带地区，在我国南北各地均有种植，分布范围较广，被人们称为果中珍品，受到人们的喜爱。石榴可食用的部分占果实的15%-40%，果实中果汁的含量为36%-61%，既可作为生食鲜果，又可将石榴的各部分应用于中草药配方中。目前，随着我国市场经济的不断发展，石榴的种植面积日益扩大。我国栽培的石榴品种多达100多个，可食用品种占其中的90%，其新产品的加工层出不穷，经济效益显著提高。但是占石榴总重约12.54%的石榴籽^[1]常被人们所遗弃，造成大量的资源浪费。石榴籽为石榴废料，近年来关于石榴籽的研究日益增多，据文献报道，干燥石榴中含有14%～27%的石榴籽油，含量极其丰富^[2]。石榴籽油中富含多种有效成分，如不饱和甾类化合物、脂肪酸、甘油三酯、磷脂及挥发油。其中不饱和脂肪酸为石榴籽油的主要成分，包括亚麻酸、亚油酸、油酸、棕榈酸等物质^[3]。近年来研究发现石榴籽油具有提高免疫力、延缓衰老、保护心血管、防癌抗癌等功效。综上所述，石榴籽油是一种极具开发价值的天然油脂，其功能多样性使它有广泛的应用前景。

阿尔茨海默病(AD)是一种神经退行性疾病，其临床特征是认知能力进行性下降和记忆力减退。神经病理学研究显示在AD中老年斑的核心部分是积聚的β-淀粉样蛋白^[4] 。近几年的科学研究已证明Aβ可导致活性氧的产生，从而诱导细胞内氧自由基数量的增加，破坏DNA和让酶失活 ^[5-7]。也有一些研究表明某些抗氧化剂可阻止Aβ对神经元的毒性，进一步说明Aβ的毒性与氧自由基数量的增加有关^[8]。因此，拮抗氧自由基的作用、减少氧自由基的生成或减少Aβ的产生和聚集被认为是AD治疗的几个良好途径。PCI2细胞同时具有肾上腺皮质细胞和交感神经元的特征，已被作为细胞模型广泛用于有关AD的研究^[9-10]。本工作主要探究石榴籽油对自由基的清除能力以及对蛋白质、DNA损伤的保护作用，进而观察石榴籽油对过氧化氢诱导的PC12细胞的保护作用，为其应用于神经退行性疾病提供实验依据，为AD中药防治研究提供理论依据。为石榴籽油的进一步开发利用提供有力的实验依据。

1.1 石榴籽油的化学成分

石榴籽油是唯一植物源的多不饱和共轭脂肪酸，含有6种主要脂肪酸：石榴酸、亚麻酸、亚油酸、油酸、棕榈酸和硬脂酸，其中前4种为不饱和脂肪酸，含量极其丰富，是石榴籽油的主要药效成分^[11]。石榴籽占石榴果实总重的12.54%，其中纤维素58.76%，占种子重量的一半以上^[12]；总糖含量为9.54%，主要是还原糖，占总糖的76%。脂肪酸占种子重量的18.22%；粗蛋白含量为12.30%，以谷蛋白为主，约占蛋白质总量的50%。灰分含量占种子重量的1.19% ^[13]。另外，还含有甾类化合物、磷脂、甘油三酯、挥发油等。

1.2 石榴籽油的药理作用

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