青虾的染色体组型分析

论文总字数：10912字

摘 要

本实验以成体青虾的肝胰腺、腮和肌肉为材料，采用低渗法、压片法和空气干燥法制备青虾染色体，对青虾进行染色体的组型分析研究。对20尾青虾各部位60个良好的中期分裂相进行了染色体的观察分析，结果表明，其中染色体数目为88的出现频率最高，达到了61.6%，因此确定青虾二倍体染色体数目为88，2n=88；通过对青虾中期分裂染色体臂长进行测量、分析和观察，其中中部着丝粒染色体（m）共计62条，亚中部着丝粒染色体（sm）共计6条，亚端部着丝粒染色体（st）共计10条，端部着丝粒染色体（t）共计10条，核型组成公式为2n= 62m 6sm 10st 10 t。通过对雌雄青虾的染色体进行了配对、对比，并未发现异性性色体的存在。

关键词：青虾；染色体；组型分析

Abstract：Through selecting hepatopancreas, gill and muscle of freshwater shrimp as material, this experiment analyzes and studies karyotype through preparing the chromosome of it with hypotonicity shock, compression method air seasoning method. After observation and analysis of chromosome of sixty completed division phases in each part of twenty tail shrimp, it can be concluded that most chromosome number of them is 88, reaching up to 61.6%, hence, the chromosome number of diploid of freshwater shrimp can be determined as 88, namely 2n=88; furthermore, through the measurement, analysis and observation of the length of metaphase chromosome arm, there are 62 metacentric chromosomes (m), 6 submetacentric chromosomes (sm), 10 subtelocentric chromosomes (st) as well as 10 telocentric chromosomes (t), the formula of karyotype is 2n= 62m 6sm 10st 10t. Besides, heterosexual epigamic color body cannot be found through the pairing and comparison of chromosome of male and female freshwater shrimp.

Keywords：Keywords: Freshwater Shrimp; Chromosome; Karyotype Analysis

目 录

1前言………………………………………………………………………………3

2材料、试剂、仪器与方法………………………………………………………4

2.1材料…………………………………………………………………………4

2.1.1青虾……………………………………………………………………4

2.1.2试剂……………………………………………………………………4

2.1.3试剂配置………………………………………………………………4

2.1.4实验器具………………………………………………………………4

2.2方法…………………………………………………………………………4

2.2.1注射秋水仙素…………………………………………………………4

2.2.2解剖取组织……………………………………………………………5

2.2.3低渗……………………………………………………………………5

2.2.4固定……………………………………………………………………5

2.2.5制片（滴片、压片）…………………………………………………5

2.2.6染色与制片……………………………………………………………5

2.2.7观察……………………………………………………………………5

3实验结果…………………………………………………………………………6

3.1青虾染色体数目的确定……………………………………………………6

3.2青虾染色体的相对长度和臂比值分析……………………………………8

3.3青虾染色体的形态特征………………………………………………… 12

4分析与讨论…………………………………………………………………… 12

1 前言

青虾学名为沼虾，主要分布于中国和日本淡水水域中，具有繁殖力高，适应性强，食性广，肉味鲜美，可常年上市等优点青虾是经济价值很高的淡水虾类之一。它生长快，个体大，繁殖快，生命力强，广泛分布于我国淡水湖泊中。青虾肉质细嫩鲜美，营养丰富，每百克食用部分含蛋白质16.40克，营养学家认为它有一定的补脑功能。

青虾分布于中国、日本、朝鲜半岛、越南、缅甸以及俄罗斯远东地区等，近年来也逐渐扩散到新加坡、菲律宾、乌兹别克、伊拉克南部以及摩尔多瓦、哈萨克、伊朗等地区。在我国，青虾广泛分布于全国各淡水水域，有事也出现在一些半咸水域，其野生资源量尤以长江流域以及华南地区为多，其中长江中下游及其所属的鄱阳湖、洞庭湖、太湖和巢湖最为丰富，另外江苏洪泽湖、山东南四湖和河北白洋淀等水域也有较大的野生资源量。上世界80年代，鄱阳湖青虾产量占虾类年总产量的30%-40%；太湖青虾产量占渔产量的4%-5%，占虾类产量的28.7%；巢湖的青虾产量约占虾类产量的16%左右；青虾是这些区域重要的捕捞产品，具有极高的经济和营养价值。近年来，随着沿海海涂的开发，养殖面积迅速扩大，已成为池塘单养、鱼虾贝类混养和虾池秋冬季养殖的重要品种^[1]。

关于染色体组型分析的报道和文章十分多，鱼类方面，王金娜等采用PHA和秋水仙素体内注射法直接制作肾细胞染色体标本，对草海鲫鱼的染色体进行了核型分析，得到草海鲫鱼的核型公式为3n=33m 24sm 33st 60t^[2] ;李岑等采用植物血球凝集素和秋水仙素活体注射法，取泰国斗鱼的肾和腮分别制备雌、雄染色体滴片，分析得泰国斗鱼的染色体组型公式为2sm 8st 32t[3] 。昆虫方面，王庆恒等采用注射秋水仙素，低渗，固定制片的方法对裸体方格星虫的染色体进行组型分析，得到了裸体方格星虫的染色体组型为2n=2x=26m 8sm，未发现性染色体和随体^[4]。可以发现，制备染色体大多数都是通过体内注射秋水仙素，低渗，固定，制片的方法来完成。

目前，国内对于虾类的染色体研究报道是比较少的。孔凡骏对斑节对虾的染色体研究，发现斑节对虾精原细胞染色体数出现频率最高的为88，因此得出了斑节对虾的染色体数目为2n=88，n=44[5] ，但并未对各种类型的染色体进行分类和计数，没有进一步的研究和探讨。李洋等对脊尾白虾染色体的研究中发现，脊尾白虾的染色体数目为90的出现频率最高，因此确定了脊尾白虾二倍体的数目为90,2n=90，对中期分裂相染色体臂长进行测量与分析发现，中部着丝粒染色体（m）有56条，亚中部着丝粒染色体（sm）有8条，亚端部着丝粒染色体（st）有12条，端部着丝粒染色体（t）有14条，核型组成公式为2n=56m 8sm 12st 14t，他们并没有发现异性性染色体的存在^[6]。

本文参照各种染色体组型研究的报道和文献，采用注射秋水仙素，低渗，固定，空气干燥法以及吉姆萨染色法对青虾进行染色体组型分析以及讨论，旨在为青虾的遗传育种、人工养殖提供参考资料。

2 材料、试剂、仪器与方法

2.1 材料

2.1.1 青虾

实验所用的青虾是采购与淮安市淮海市场的水产摊位，共采购80尾，挑选出大小基本相同的10尾雄虾，10尾雌虾。采购回的青虾放置于实验室的22℃水箱中，通入氧气，每天喂养一次，每2天换一次水。实验过程中，取虾的肝胰腺、腮、肌肉为实验材料。

2.1.2 试剂

0.02%秋水仙素水溶液

0.070mol/L、0.075mol/L、0.080mol/L氯化钾低渗液

卡诺氏固定液

吉姆萨原液

PH7.2磷酸盐缓冲液

2.1.3 试剂配制

0.02%秋水仙素水溶液：10mg的秋水仙碱和180mg的氯化钠溶于20ml的蒸馏水中（避光保存）

0.070mol/L氯化钾低渗液：0.521g KCL溶于100ml蒸馏水中（现配现用）

0.075mol/L氯化钾低渗液：0.559g KCL溶于100ml蒸馏水中（现配现用）

0.080mol/L氯化钾低渗液：0.596g KCL溶于100ml蒸馏水中（现配现用）

卡诺氏固定液：甲醇和冰乙酸按体积3:1 配制，甲醇和冰乙酸按体积1：1配制（现配现用）

吉姆萨使用液：吉姆萨原液和磷酸盐缓冲液按体积1:9 配制（棕色瓶保存）

2.1.4 实验器具

电子称重计，水浴锅，Olympus显微镜，移液枪，镊子，剪刀，载玻片，烧杯，量筒，研钵，离心机，离心管

2.2 方法

2.2.1 注射秋水仙素

从水箱中取出青虾，按虾的体重每5g注射0.1ml的标准向青虾的第二节腹肢底部注射秋水仙素，将注射完秋水仙素的虾放入水箱中继续养6小时。

2.2.2 解剖取组织

6小时后，取出青虾，将其解剖，取出肝胰腺、腮和肌肉，然后进行切片，将它们切成小块。由于肌肉较难切片，所以将肌肉置于研钵中，加入生理盐水和石英砂进行研磨，研磨后进行过滤、离心，得到细小的肌肉碎末。上述过程所对应的每个部位都标注好虾的性别，以便后续的观察和总结。

2.2.3 低渗

将上述的组织切片分别置于标注好性别和部位的离心管中，由于低渗的好坏关系到染色体的分散情况，对青虾的最佳低渗时间和低渗液浓度尚不明确，参考文献中是0.075mol/L，故分两种方案进行。

方案.1 分别取三种浓度的KCL低渗液，浓度为0.070mol/L、0.075mol/L、0.080mol/L，低渗时间都为1小时15分钟，温度为40℃，由此来确定低渗液的最佳浓度。

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