利用PCR方法检测食品中的花生过敏原

论文总字数：15230字

摘 要

世界各地的许多美食都用花生作为原料，但它也是很常见的主要食物过敏原之一。为了防止过敏反应的发生，最好的方法是避免食用含花生等过敏成分的食物。但在实际的生产过程中，食品加工往往需要经过复杂的生产工艺，会造成食品之间的交叉污染，部分食品难以准确判断是否含有花生过敏原，因此对于检测食品中的花生过敏原就显得十分重要。本研究通过建立聚合酶链式反应技术（PCR）来检测食品中花生过敏原的基因，结果表明，设计的PCR引物对食品中花生过敏原的检测具有高度特异性，并且与其他种类的坚果没有交叉反应，包括腰果、芒果、核桃、杏仁、夏威夷果、榛子、开心果和大豆，该方法的最低检测限度为1pg花生基因组DNA，最后，从煮沸和高温高压处理花生中提取的基因组DNA作为模板，研究表示PCR技术对花生的检测没有影响，这种技术在检测商业化食品中的花生过敏原方面也显示出高度的灵敏性和可靠性。

关键词：花生，过敏反应，聚合酶链式反应

Abstract：Many foods around the world use peanuts as a raw material, but it is also one of the most common food allergens. In order to prevent allergic reactions, the best way is to avoid eating foods that contain allergic ingredients such as peanuts. However, in the actual production process, food processing often requires complicated production processes, which will cause cross-contamination between foods. Some foods are difficult to accurately determine whether they contain peanut allergens. Therefore, it is very common for detecting peanut allergens in foods. important. In this study, the polymerase chain reaction (PCR) method was used to detect the peanut allergen gene in food. The results showed that the designed PCR primers were highly specific for the detection of peanut allergens in food, and did not have other types of nuts. Cross-reactions, including cashews, mangoes, walnuts, almonds, macadamia nuts, hazelnuts, pistachios, and soybeans. The minimum detection limit for this method is 1 pg peanut genomic DNA. Finally, genomic DNA extracted from boiled and high temperature and high pressure treated peanuts is used as a template. Studies have shown that PCR technology has no effect on peanut testing, and this technique also shows a high degree of sensitivity and reliability in detecting peanut allergens in commercial foods.

Key words：Peanut, allergic reaction, polymerase chain reaction

目录

1 引言 5

1.1过敏原的概述 5

1．1.1过敏反应发生的机制 5

1．1.2如何避免过敏反应的发生 6

1.2过敏原的检测方法 6

1．2.1酶联免疫吸附试验 6

1．2.2聚合酶链式反应(PCR) 6

1.3 聚合酶链式反应的研究进展 6

1．3.1 PCR技术的基本原理 6

1．3.2 PCR流程 7

1．3.3 PCR技术的应用 7

1.4 研究目的及研究内容 7

2材料与方法 8

2.1实验材料 8

2．1.1试剂 8

2．1.2实验仪器及设备 8

2.2实验方法 8

2.2.1基因组的提取 8

2.2.2基因组DNA的纯度和浓度测定 9

2.2.3 PCR检测引物的设计与合成 9

2.2.4 PCR反应体系的配制与反应的进行 10

2.2.5 产物的检测 10

2.2.5.1 特异性的检测方法 11

2.2.5.2 灵敏度的检测方法 11

2.2.5.3煮沸的检测方法 11

2.2.5.4高温高压的检测步骤 11

2.2.5.5商业化食品的检测方法 11

3 实验结果 11

3.1 PCR引物的分布图 12

3.2 特异性分析 12

3.3 灵敏度分析 13

3.4 煮沸处理 14

3.5 高温高压处理 14

3.6 商业化食品的检测 15

4讨论 16

结论 18

参考文献 19

致谢 21

1 引言

花生，是我国一种分布极广、普遍食用的坚果，但也是非常常见的主要食物过敏原之一^［1］。花生属于豆科植物科，世界各地的许多美食都用花生作为原料^［2］。食物过敏对全球健康的挑战和影响高达总人口的1-10％^［3］。关于健康风险，由针对食物蛋白的免疫球蛋白E同种型抗体介导的所谓立即型过敏反应是最突出的。食物摄入后，症状的发作通常在几分钟内发生甚至更加严重，可能导致危及生命的反应。到目前为止，致病性免疫疗法治疗在临床常规中是不可用的，主要是因为潜在的严重副作用和缺乏安全有效的免疫治疗试剂。因此，严格避免违规食物仍然是避免过敏反应的唯一有效选择。

1.1过敏原的概述

过敏原就是能够让身体发生过敏反应的物质。当机体第一次与致敏原接触时，我们身体不会产生过敏的反应，但是体内会产生特异性的抗体，当第二次接触相同的抗原后，这种抗体就会与它结合，释放多种活性的介质，从而引发过敏的症状。

1．1.1过敏反应发生的机制

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