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摘 要

高效液相色谱法具有快速、效率高、准确度高的优点, 所以虽然是一种新的检测技术手段，但如今已经在多个领域被广泛的使用，不仅是药品食品生产的过程，在环境监测的时候也被青睐。本文简单的概述了高效液相色谱法，并在优化过的色谱条件下，对倍他米松的有关物质进行研究，对其含有的杂质定性分析，结果是倍他米松在波长254nm,流速1.0 ml/min，柱温45℃时检测结果最佳。

关键词：高效液相色谱法；倍他米松 ；有关物质

Determination of Betamethasone by HighPerformance Liquid Chromatography

Abstract

High performance liquid chromatography has the advantages of speed, high efficiency, and high accuracy. Therefore, although it is a new detection technique, it has been widely used in many fields today, not only in the process of drug and food production. It is also favored when monitoring the environment.I n this paper, a brief overview of high performance liquid chromatography (HPLC) was given. Under the optimized chromatographic conditions, the related substances of betamethasone were studied. The impurities in betamethasone were qualitatively analyzed. The results showed that betamethasone had the best detection results at 254 nm, 1.0 ml/min and 45℃.

Key words: High Performance Liquid Chromatography, Betamethasone, Related substances

目 录

摘要 I

Abstract II

第一章引言 1

1.1研究背景 2

1.2主要仪器 2

1.2.1高压泵 2

1.2.2色谱柱 3

1.2.3检测器 3

1.3研究对象 4

1.4主要测定方法 4

1.4.1面积归一化法 5

1.4.2自身对照法 5

1.4.3内标法 5

1.4.4外标法 5

1.5研究目的 5

第二章实验内容 7

2.1仪器与试药 7

2.2方法 7

2.2.1色谱条件 7

2.2.2溶液的制备 7

2.2.3系统适应性试验 8

2.2.4样品的测定 9

第三章实验分析与小结 10

3.1结果判定 10

3.2实验色谱图及数据 10

3.2.1灵敏度测试溶液色谱图 10

3.2.2峰鉴别图谱 11

3.2.3倍他米松供试溶液图谱以及数据 11

3.3具体计算步骤 12

3.4分析与讨论 13

3.4.1流速的选择 13

3.4.2流动相的确定 14

3.4.3溶剂的选择 14

3.5小结与展望 14

第四章结束语 16

致谢 17

参考文献 18

引 言

药品是以人体为使用对象，并且其成分，有效组分的含量，服用方法，食用量等不同因素都能决定药物的使用效果，是一类相当特别的商品^[1]，而且是关系患者的生命健康息息相关的一种特殊物质，其质量控制极为重要。尤其在药业生产中，质量控制是一个不可或缺的步骤，它是用来消除在药品的生产过程中每个步骤可能引进的杂质，达到控制杂质含量的目的，借此达到规定的药物标准，最后获取经济利益的一个过程。

评估药物的安全性是药物生产过程中最重要的一项工作，其中的关键环节是药物中所含有的有关物质的质量分数控制，在药品生产后检测药品的有关物质已经成为药业都会进行的程序^[2]。在检验药物安全性的程序中，有多种检测方法其中包括高效液相色谱法，气相色谱法，紫外分光光度法，气质联用法，薄层色谱法，射线衍射法等^[3]，其中高效液相色谱法不仅有极高的灵敏度，而且尤其关键的是它能比较好的分离相似结构的药物，而被应用在多种药物的检测过程中。

高效液相色谱法是从20世纪的中后期后，随着科技的飞速发展和气相色谱的理论被引入后，在早期的经典液相色谱中加入高压泵和固定相并与之结合后开始迅猛发展起来的一种检测方法。它是以液体作为流动相，再使用高压系统将规定的流动相泵入装有固定相的色谱柱之中，然后在色谱柱内将极其微量样品分离之后在送入检测器中进行响应，从而分析样品的检测。HPLC有下列的这些特征:一为高压，它的压力最高可以达到300kg/;二为高速，其流速最大能够达到10.0mL/min;三为高效，可在一根色谱柱中快速分离近百种样品的组分;四为高灵敏度，其紫外检测器消耗的检测样品极其微量但灵敏度能达到很高的程度^[4]。并且因为其具有的高速、高灵敏、高准确度等优点,在药品、食品、环保等多个领域进行了广泛的应用。

本文就液相色谱法的发展状况，以及在原料药的有关物质测定中所起的作用，以倍他米松为例，详述用HPLC法测定其有关物质的方法。

1.1 研究背景

高效液相色谱法自上世纪后期问世以来,逐渐研制出不同型号的色谱柱，在与高压装置结合后,从而达到了对样品进行快速、高效率和高准确性的分离测定的目的^[4]。在1990年以后，生物工程不仅在国际有大的进展，而且在国内迅猛发展，在液相色谱技术领域产生了很多、很新颖的研发课题^[2]，如人类基因组计划，蛋白质组学有HPLC作预分离等有关分离纯化的新型工程。如今的高效液相色谱并不是通过人工在仪表盘上直接操作具体的色谱参数，而是通过电脑来间接控制仪器的，操作员通过电脑可以控制仪表的所有参数，除了波长外，流量，柱温等功能都可以操作。并且可以在样品溶液进样完成，所有的检测完毕之后，对产生的供试溶液的色谱图上进行放大图谱或缩小图谱的操作，当然不是所有的操作员都可以，需要满足电脑所需的权限才可以直接对有关杂质的保留时间，峰高，峰宽以及峰面积进行必要的处理工作。这些为从事色谱分析的操作员提供了快速、高效的工作方式，同时它也是基础功能完备的分析工具。

高效液相色谱的使用范围非常的广,尤其是在分析高沸点的化合物或者是分离大分子的化合物上应用的很多。目前,高效液相色谱已成为无机及分析化学、生物化学、药物合成、食品质量监测、环境监测等学科领域中^[6]，占据重要地位的一种分析手段，并且除此之外,在实验室内是专家运用来解决分离分析问题的一个关键工具。HPLC法因其具有的独特的优势已经被普遍地应用于药物的纯度的测定、药物成品中杂质的检测等方面,已成为实验室、药厂最重要的分析方法之一。

1.2 主要仪器

高效液相检测装置一般有这三个构成，即高压泵、色谱柱和检测器,其中高压泵和检测器都有多个种类。

1.2.1 高压泵

高效液相所使用的色谱柱的内径是相当细的，最细的色谱柱的只有1mm，最大的也仅有6mm而已，所以这导致检测样品时所选择的固定相颗粒不能大，甚至小到只有几微米才可以。这个状况直接造成的后果是流动相检测进行中通过色谱柱时会遭受到相当大的阻力，在标准的大气压下，流动相流速会很慢，并且耗费时间。所以人们为了解决色谱柱中流动相通过时阻力偏大的情况，加快流动相在色谱柱内通过的速度，选择在流动相运行的时候，给它很大的压力，借此来达到高速省时的目的。这个相当大的压力就是由高压泵给予，它有下列的两种类型。

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