论文总字数：19462字

摘 要

目的：IPTG的全称是异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷，β-半乳糖苷酶它的底物存在类似物，这个类似物就是是IPTG。现如今，IPTG已经普遍的应用于生物实验室当中。当我们需要进行原核表达时，其中一个重要的手段就是添加IPTG进行诱导，这已经是获得蛋白表达的重要手段。IPTG被添加进行诱导，不仅成本低，而且表达量高，产物稳定，易于鉴定。IPTG已经普遍的应用到生物实验室当中，因此探讨IPTG的诱导效果具有现实的意义，不仅能够保证IPTG的诱导效果，还能够降低实验成本，实验室长足的发展奠定基础。

方法：本课题主要是采集某一厂家不同生产批次的IPTG产品，比较在原核表达中的诱导效果。首先在课题开展的初期，做一些比较基础的实验，这些实验采用的是现在技术非常成熟的手段。再将已经克隆好了目的基因序的pET载体，通过热激法转化到BL21(DE3)细菌中。转化成功后，添加采集的不同批次的IPTG样品进行诱导，比较IPTG在原核表达中的诱导效果。

结论：选取的三个不同生产批次样品均有表达，2号批次表达效果最好，其次1号批次，再是3号批次。

关键词：IPTG ；pET载体；原核表达；诱导

Comparison of the three manufacturers of IPTG induction of expression in prokaryotic

Abstract

Aim:The whole name of IPTG is isopropyl -β-D- thio-galactopyranoside.It is the substrate analogs of β- galactosidase.Now,IPTG has been widely applied in β- galactosidase.When obtaining protein expression,we can add IPTG to induct prokaryotic expression.It has been an important means of obtaining protein expression

Adding IPTG to induct protein expression is not only low cost, high expression levels, product stability, but also ease of identification.IPTG has been widely applied into biological laboratories .Therefore investigating the effect of IPTG induction has practical significance.It is not only to ensure IPTG induction, but also can reduce the cost of experiments, the foundation laboratory leaps and bounds.

Methods: The main subject is to collect three different production batch of IPTG products from a company.Then compare the effect of inducting prokaryotic expression.We do some basic experiments at the beginning of the subject.These basic experiments use very mature technology now . Then cloning the target gene sequence into the pET vectors and transforme the vectors into BL21 (DE3) bacteria.Adding different batch of IPTG into BL21 (DE3), comparing expression in a prokaryotic IPTG induction effect.

In conclusion: All the batch of IPTG can induct protein expression.And all have a good effect.But it also exists differences, 2 batches expression effect is best, second batch 1, then the 3 batches.

Keywords: IPTG pET vector prokaryotic expression induced

目 录

摘 要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1研究现状、成果 1

1.2这次研究目的、方法 4

第二章 制备感受态DH5α及DH5α的转化 5

2.1 实验材料 5

2.1.1 实验试剂以及耗材 5

2.1.2 实验仪器 5

2.2 实验方法 5

2.2.1 实验原理 5

1.2.2 操作步骤 6

2.3实验结果以及分析 7

第三章 抽提质粒 9

5.1 实验材料 9

5.1.1实验试剂以及耗材 9

5.1.2实验仪器 9

5.2实验方法 9

5.2.1实验原理 9

5.2.2操作步骤 9

5.3实验结果以及分析方法 10

第四章 制备感受态BL21(DE3 )及转化 11

3.1 实验材料 11

3.1.1实验试剂以及耗材 11

3.1.2实验仪器 11

3.2实验方法 11

3.2.1 实验原理 11

2.2.2 操作步骤 12

3.3 实验结果以及分析 13

第五章 比较不同批次的IPTG在原核表达中的诱导效果 14

8.1实验材料 14

8.1.1实验试剂以及耗材 14

8.1.2实验仪器 14

8.2实验方法 14

8.2.1实验原理 14

8.2.2操作步骤 15

8.3实验结果接分析 16

第六章 小结 17

第七章 附件 18

附件一 分离胶配方 18

附件二 浓缩胶配方 19

附件三 各种溶剂的配制 19

致谢 21

参考文献 22

第一章 文献综述

1.1研究现状、成果

1.IPTG(异丙基硫-β-D-半乳糖苷)

IPTG的全称是异丙基硫-β-D-半乳糖苷。β-半乳糖苷酶它的底物存在类似物，这个类似物就是IPTG。乳糖启动子不能自主启动，通常需要诱导，而IPTG就是充当诱导剂的作用，作用能力非常高效，有很强的诱导力[1]。它的诱导原理相和乳糖的诱导原理不一样，相对简单一些。1960-1961年，“操纵子”学说被科学家莫洛和雅各布首次提出，在1965年获得了诺贝尔生理学和医学奖。而操纵子和IPTG的诱导原理联系密切联系。所谓操纵子，就是由一个一样的控制区来控制排列在染色体上结构基因串联的表达，这些结构基因有很多相关功能，而操纵子就是那些包括这些结构基因以及控制区的全部核苷酸序列。

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