摘 要

本文使用药品为联苯乙酸巴布剂，小鼠皮用来模拟人体皮肤，经体外透皮仪对小鼠皮进行透皮给药，对接收池取样并通过HPLC进行色谱分析。采用的高效液相色谱法，色谱柱为C18柱，流速1.0mL/min，柱温25℃，检测波长254nm，流动相为甲醇:1‰的乙酸水溶液(70:30，v/v)。含量检测结果良好，接收液联苯乙酸浓度与透皮时间呈现良好的线性关系，自制品透皮效率优于商品药，透皮效果良好。

关键词：联苯乙酸 体外透皮给药 高效液相色谱

Abstract

In this paper, Biphenyl acetic acid of cataplasm was used as the medicine and the skin of mice was used to simulate the skin of human body. The skin of mice was treated with transdermal drug delivery system in vitro. The samples were collected at the docking pool and analyzed by HPLC. The HPLC column, C18 column, flow rate 1.0mL/min, column temperature was at 25C, detection wavelength 254nm, mobile phase methanol: 1‰ acetic acid water solution (70:30, v/v). The results showed that the concentration of benzidine acid in the received liquid showed a good linear relationship with the transdermal time. The transdermal efficiency of the self-made product was better than that of the commercial medicine and the transdermal effect was good.

Keyword: biphenyl acetic acid;transdermal drug delivery in vitro;HPL

目录

第一章 文献综述 1

1.1巴布剂的特点 1

1.1.1巴布剂的物理化学结构 1

1.1.2巴布剂药物载体的优点 1

1.2联苯乙酸的概述 1

1.2.1联苯乙酸的物理性质 1

1.2.2联苯乙酸的化学性质 1

1.2.3联苯乙酸的用途 2

1.3透皮给药系统 3

1.3.1透皮给药系统概念 3

1.3.2透皮给药发展历史 3

1.3.3透皮给药系统优点： 3

1.3.4透皮给药系统的局限性和研究方向 4

1.3.5透皮给药系统常用促透方法 4

1.4体外透皮实验 5

1.4.1皮肤模拟物的制备 5

1.4.2动物皮肤的应用 5

1.4.3扩散模型的设计 5

1.5高效液相色谱法 6

1.6研究思路 6

第二章 材料与方法 7

2.1实验仪器 7

2.2实验材料 7

2.3巴布剂的制备 8

2.3.1处方 8

2.3.2 实验过程 8

2.4 透皮实验 9

2.4.1鼠皮的制备 9

2.4.2 体外透皮装置及其操作 9

2.5 HPLC色谱条件 10

2.5.1标准曲线的数据获取方法 10

2.5.2精密度的检验方法 11

2.5.3稳定性的检测方法 11

2.5.4回收率的测定方法 11

2.5.5样品含量测定方法学 11

2.5.6选取四张小鼠皮在6h时的HPLC色谱图 11

第三章 结果与讨论 12

3.1标准曲线的建立 12

3.2精密度的测定 12

3.3稳定性分析 13

3.4加样回收率 14

3.5样品含量测定 14

3.6体外透皮实验 17

3.7 讨论 20

第一章 文献综述

1.1巴布剂的特点

1.1.1巴布剂的物理化学结构

作为凝胶软膏剂的一类代表药物，能够直接使用在人体或动物皮肤上，主体结构是高分子聚合物，且该类聚合物具有水溶性。通过将具有药物活性的物质与亲水基质混合，然后在无纺布之类的材料上压片成型。^[1]

1.1.2巴布剂药物载体的优点

将巴布剂作为载体，能够一次性就运载相当大的药量，避免了频繁换药的麻烦。

由于巴布剂黏性大，且外层由塑料薄瞙、无纺布包裹，内层直接接触皮肤，因此药品不易挥发，且能够保持相当长时间的湿度，不易从皮肤上脱落，有利于长期给药并保持一定的吸收度。^[2]

巴布剂的主体架构是亲水性高分子材料，因此，与药物结合后，提高了药物的活性，并且使得药物能够更好地透过皮肤屏障发挥治疗作用。

使用水溶性材料制作，不会产生有机毒害，对人体和环境友好。

1.2联苯乙酸的概述

1.2.1联苯乙酸的物理性质

联苯乙酸，俗称非必拉克。其在常温下为白色结晶。溶解度性质方面，易溶于二甲基甲酰胺，难溶于乙醇、冰醋酸，在水中几乎不溶解。易燃，燃着时形成刺激性毒烟。^[3]联苯乙酸是有毒化学品的一种，对人体能够产生刺激作用。因此做联苯乙酸实验时，小心规避与皮肤、眼睛的直接接触。

1.2.2联苯乙酸的化学性质

联苯乙酸由芬布芬代谢得到，因此，两者的消炎作用有些相似。联苯乙酸的化学名称是4-联苯基乙酸，分子式为C₁₄H₁₂O₂，分子量212，溶点在162~164℃之间。一般具有羧基和联苯共有的一些反应特性。^[4]不可与强氧化剂相互配置，聚合产物安全性高，不容易产生有害聚合物。化学应用方面，主要用来合成联苯乙酸乙酯作为消炎镇痛药的中间体。

联苯乙酸分子结构：

1.2.3联苯乙酸的用途

联苯乙酸在肝脏中会发生首过效应，造成利用率低下。经过消化道时由于会被胃肠道中的消化溶酶解离，联苯乙酸的活性也会受到极大的削弱。因此，联苯乙酸制成药剂时不宜制成口服制剂供病患使用。而制成透过皮肤吸收给药的透皮巴布剂，能够很好地发挥联苯乙酸的药效。

制成巴布剂后，联苯乙酸药物透过皮肤屏障经皮下毛细血管吸收转运入人体循环，到达病灶部位，通过阻断前列腺素的合成路径，来抑制前列腺素产生，将炎症发生的介质环境消除，实现镇痛消炎的目的。^[5]

相比于其它巴布剂，联苯乙酸作为巴布剂的活性材料，在某些病症的处理应对上具有其独特的优势：比如能够很轻易地穿透肌肉滑膜，在炎症部位长时间驻留，持续地对病变部位发挥药效。还可以很好地缓解关节炎带来的慢性疼痛，不仅对治疗慢性疼痛有效，也是肌肉痛之类急性炎症的速效药物。贴布在皮肤上，无刺激作用，还带有一定的清凉感，没有惹人生厌的臭味，是日常家居中非常便利可靠的药剂。

1.3透皮给药系统

1.3.1透皮给药系统概念

透皮给药，顾名思义，是指药物通过透过皮肤来到达病灶起到缓解病症的目的。药物制剂与皮肤紧密接触后,其药物活性物质经由皮肤角质层扩散到内皮部分,再借由皮下毛细血管吸收，随体液循环发挥全身疗效或局部治疗。^[6]现在较为常见的剂型有软膏硬膏、贴剂、涂剂、喷剂等。

1.3.2透皮给药发展历史

TTS-东莨菪碱透皮贴剂是历史上首个上市的巴布剂，从那以后，经过了三十多年的发展研究，现在透皮贴剂已成为常用药物剂型中举足轻重的一个大类。

中国作为有着几千年不间断文化传承的古国，经皮给药已经延续存在了千百年的时光，各类医学典籍中都与关于它的记载。^[7]随着科技经济的发展，将古老的中医学贴剂结合到现代医疗技术领域，来发挥更好的疗效，也目前流行的课题之一，可以预见透皮贴剂还有很大的发展空间。

1.3.3透皮给药系统优点：

透皮给药具备下列优势:^[8]

（1）由于不用通过肝脏和胃肠道，因此可以免除首过效应，药物不经过胃肠，不会被其中的溶酶或酸性物质破坏，提高药物的利用率。

（2）减少毒副作用的产生。透皮给药由于不经过人体内脏组织，减少了药物对人体可能造成的伤害。

（3）可以制作更大一些的贴剂，使皮肤吸收面积增大。透皮贴剂贴在皮肤上，接触表面积大意味着用药面积大，便于皮肤的吸收，用药量不够的问题也得到了解决。

（4）可以长时间维持一定的速率将药物运送到病症部位，从时间上来讲实现了静脉给药的优势，而不同的是，透皮给药不存在静脉给药潜藏的危害和不安全性。透皮给药将血药浓度在用药期间都保持在有效水平以上，浓度平缓，^[9]不会使体内药物浓度呈现波峰波谷的起伏变化，显著减少了不良反应的发生率。

（5）对患者来讲使用贴剂来治疗非常省心，它可以反复使用，而且想不用了，撕掉贴剂就是了，所有的事情患者一个人就可以处理好，不会产生任何麻烦，给患者带来其它用药方式都不具备的极大方便。

1.3.4透皮给药系统的局限性和研究方向

皮肤是人体的屏障，它帮助我们抵御了很多病毒或有害物质的入侵，但于此同时，它也对贴剂透过皮肤发挥药效产生了阻碍，而这也是目前透皮贴剂的一个有待深入研究和攻克的一个方向。

使用的药物范围有一定的局限，必须是易于透皮的药物，这样使得在治疗某些病症时药物的筛选就变得很困难，既要保证药效又要考虑透皮性，备选药物范围就被缩小了。还有对皮肤潜在的刺激性也要考虑，会不会引起皮肤的病变，需要多少面积的皮肤吸收才能够达到发挥药效的血药浓度，这些都是透皮贴剂需要解决的疑问。

由此可以看出，药物对于皮肤渗透的难易程度以及对是否对皮肤有较大的刺激性这两方面，是透皮贴剂研究的攻关重点。^[10]研究人员需要加大对药物透皮机理研究的力度，发掘寻找对皮肤温和且渗透率高的新介质。

1.3.5透皮给药系统常用促透方法

要提高药物透皮作用，要么减少皮肤对药物的阻碍，要么增强药物的透过能力。^[11]下面介绍几类常见的皮肤促透方法。

药剂学方法：使用皮肤吸收促进剂，它的作用机制主要是：（1）使皮肤角质层中的脂质排列变得无序混乱，增加了细胞之间的通透能力，常使用的药剂是氮酮；（2）和角质细胞里面的蛋白相互作用，促进细胞内通道的通透能力，常使用二甲亚砜； （3）更好地运送药物透过角质层，丙二醇和乙醇地效果很好。中药挥发油是目前的热门研究方向。^[12]

化学法：修改药物化学构造，生成透皮能力更强的的前体药物，常见的有亲脂性可溶酶和表面活性剂。

物理法:借助离子或超声波促透，激光辅助给药。^[13]

1.4体外透皮实验

将皮肤或模拟物放入设计好的扩散模型，并与待测药物接触，然后检测各项数据。实验难点在于如何制作离体皮肤或皮肤模拟物，还有扩散模型应该如何建立。

1.4.1皮肤模拟物的制备

根据将要做的透皮给药实验的目的来选择相应的皮肤模拟物。若想比较多种药剂的释放能力差异，就可以选择有指示剂的凝胶作皮肤模拟物，相同时间内指示剂颜色的变化能很好地显示药物的释放快慢。总之，根据待测试药物的性质，^[14]来修改选择合适的皮肤模拟物。

人工皮肤膜技术能够很好的模拟真实皮肤的性质。^[15]而最前沿的模拟物，经透皮测试，与真实皮肤的相关系数已经有0.95，是相当完美的实验材料。

1.4.2动物皮肤的应用

动物皮肤在很多方面它的性质和人体皮肤很接近，所以很多时候可以直接使用动物皮肤来替代。目前科研实验上使用较多的是取自4到7周龄无毛小鼠的皮肤，^[16]研究表明，这一年龄段的小鼠皮的渗透特性和人体皮肤极为相似，且来源广泛便于获取，使用方便，是很好的实验材料。

但是，能够完全代替人类皮肤的材料尚未被发现或研究出来。

1.4.3扩散模型的设计

最早的体外透皮仪器比较简单，将硅硼玻璃渗透池分为扩散和接收两个半池，中间放置待测皮样。操作时扩散池液面高度要比接受半池的高个一到两厘米，这样才能产生正压力，接受半池中放置有搅拌棒，整个透皮装置都置于恒温水浴池中，为防止挥发，半池进取样口都要加塞密封。

目前，主流的扩散模型都是以两半池结构为基础，然后在温度控制、进样口封闭与否、搅拌方式、检测连续性、PH调节这些细节上根据实验条件和要求做一些改进，更合理地模拟人体皮肤的透皮吸收过程，使实验数据结果更加可信。

1.5高效液相色谱法

高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography）简称HPLC法，是现代色谱法的一个重要分支，检测非常地高效，相比传统的方法，能够很快地得出测试结果，灵敏度高可以监测到很微量的待测物，可测定的物质范围也相当的广泛。^[17]液体作流动相，高压输液装置将流动相压入含有固定相的色谱柱，流动相各个物质的极性有差异，流经固定相时，借助分配系数的不同，产生流动速率差别逐渐检测各个物质。分离的物质先后进入检测器检测，实现对样品的分析。

1.6研究思路

(1) 采用高校液相色谱建立联苯乙酸的检测方法，并对其进行验证。

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