摘 要

盐酸美克洛嗪（MZH）和氢溴酸东莨菪碱（SH）是大正药业（日本）生产的Sempaa片剂中的两种主要活性成分，专为患有晕动症的儿童研制的。然而，我们在对这一片剂进行含量测定时，需要分别单独地测定这两种活性成分，但是这个过程十分繁琐。在药典以及以往的研究中，查阅不到能够同时测定这两种活性成分的内容和方法。为了使该复方片剂的含量测定变得简单且准确，我们应该建立一种新的既能测定其中盐酸美克洛嗪又能测定氢溴酸东莨菪碱的含量的HPLC法。本分析方法使用的色谱柱为Pursuit XRs C₁₈（250 mm × 4.6 mm，5 µm）；流动相为乙腈和磷酸二氢钾缓冲液（0.02mol/L，磷酸调pH至4.0）的混合溶液，比例为45:55（v/v）；柱温为40℃；检测波长为254 nm。经过一系列的实验，其结果显示，本方法的确可以同时测定Sempaa片剂中两组分的含量，且两种组分的保留时间均小于10min，分离度好，分辨率高。综上所述，此次研究建立的新的高效液相色谱法适用于其两种成分的同时测定以及稳定性指示。片剂中的基质成分不干扰两种活性成分的高效液相色谱图。此方法准确度高，重现性好。中国药典中对高效液相色谱测定方法的回收率，偏差和相对标准偏差的规定所规定范围，本方法中测定的数据均符合相关规定。

关键词：MZH SH 高效液相色谱法 含量测定 晕动症

A HPLC method for simultaneous detection of Scopolamine Hydrobromide and Meclozine Hydrochloride

Abstract

Meclizine hydrochloride and scopolamine hydrobromide are the active ingredients in Children's Sempaa tablets produced by Taisho Pharmaceutical Company (Japan) specifically for children with motion sickness. However, when we determine the content of this tablet, we need to separate the two active ingredients, but the process is very complicated. In previous researches, no one reported a method which can simultaneous determine MZH and SH in their dosage formulation. To simplify the content determination of the compound preparation, an accurate HPLC method capable of determining both Scopolamine Hydrobromide and Meclizine Hydrochloride should be established. Pursuit XRs C18 (250 mm x 4.6 mm, 5 m) was used as the chromatographic column for this analysis method. The mobile phase was the combination of 55% 0.02mol/L Potassium dihydrogen Phosphate buffer (pH4.0) and 45% acetonitrile. The column temperature was 40℃ and the detective wavelength was 254nm. The retention time of the two components was less than 10 minutes with good resolution. After a series of experiments, the results show that the method can be used for the simultaneous determination of two components in Sempaa tablets. Matrix components did not interfere with the HPLC chromatograms of the two active ingredients. The method was accurate, repeatable and reproducible. The percentage recovery, bias and relative standard deviations for the HPLC measurements were within Chinese Pharmacopeia limits.

Keywords: Meclizine Hydrochloride；Scopolamine Hydrobromide； HPLC；Determination of content; motion sickness

目录

摘 要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1研究背景 1

1.2 盐酸美克洛嗪和氢溴酸东莨菪碱的概述 2

1.2.1 盐酸美克洛嗪 2

1.2.2 氢溴酸东莨菪碱 2

1.3 高效液相色谱 4

1.3.1 HPLC简介 4

1.3.2 HPLC的原理 4

1.3.3 HPLC的优缺点以及应用 4

第二章 现有的分别对MZH和SH含量测定方法 5

2.1 引言 5

2.2 文献报道单独地对药物制剂中MZH和SH含量测定的分析方法 5

2.3 中国药典中对盐酸美克洛嗪原料药及其片剂的含量测定法^[28] 5

2.3.1盐酸美克洛嗪原料药的含量测定法 5

2.3.2盐酸美克洛嗪片中MZH的含量测定法 6

2.4 中国药典中对氢溴酸东莨菪碱原料药及其药物制剂的含量测定法^[29] 6

2.4.1 氢溴酸东莨菪碱原料药的含量测定法 6

2.4.2 氢溴酸东莨菪碱片的含量测定法 6

2.4.3 氢溴酸东莨菪碱注射液的含量测定法 7

2.5 小结 7

第三章 同时测定MZH和SH的高效液相色谱法的建立 8

3.1前言 8

3.2 实验部分 8

3.2.1材料 8

3.2.2 方法 10

3.2.3 结果 11

3.2.4 方法学验证 13

3.3 小结 18

第四章 结果与讨论 20

第五章 展望 21

第六章 致谢 21

第一章 文献综述

1.1研究背景

晕动症（motion sickness），是一种囊括了人在各式各样的因素下引起的摇晃、颠簸、转动以及加速运动和在乘坐交通工具如飞机、轮船、汽车等引起的不适感的疾病。

导致晕动症发生的关键因素现被认为是人的感受器官、视觉器官、听觉器官、嗅觉器官和味觉器官等将一种抵抗信息传给大脑：人的视觉器官无法正确判断对于相同的参考物和交通工具的运动在内耳平衡机制这两部分的联系。随后对这种较混乱的感觉则是由人的大脑、脊髓等组成的中枢神经系统进行处理：由恶心、呕吐神经产生响应，令人感到不适。故患有晕动症的人在乘坐飞机、汽车、轮船和火车或者某些运动几分钟到几小时以后，最开始感觉到腹部上侧与胸口处不适，随后出现恶心、出冷汗、脸色发白、头晕、唾液分泌增加甚至导致呕吐等症状。通常在停止乘坐交通工具或运动之后有缓解，同时也有数天后才逐渐恢复的案例，同时这些人还伴有头晕目眩、四肢乏力的症状。重复运动后症状可再次产生^[1]。

近年来的研究还发现晕动症的发生与偏头痛有一定关系：偏头痛的患者前庭症状明显多于对照组（无头痛受试者），具体而言即这些患者具有更多的头晕和眩晕发作同时还伴有更多的晕动发作^[2]。也曾有学者针对晕动症导致的呕吐症状提出进化论的问题：其认为视觉、前庭或人体输入所定义的空间框架之间的关系反复受到不可预测的干扰时，眼球或者头部运动规划出现的困难会引起眩晕。而这种眩晕可能是因为某些类型的晕动所引起的，又或是由摄入的毒素引起的感官输入或是运动控制的干扰。最后是自然界重要原因，呕吐即是机体排出被个体摄入的神经毒素的过程。它的发生对运动的反应将是这一系统一系列的偶然副产物^[3]。

在全世界，中国是晕动症发生率最高的国家，有高达百分之八十的人曾出现过不同程度的晕动反应，并且这种疾病目前为止尚未有彻底治愈的方法，可是人们可以通过选择合适的抗晕动症药物来缓解晕动症带给人们的痛苦。如今人们用的最多的药物是氢溴酸东莨菪碱和盐酸美克洛嗪及其制剂，例如晕车贴（一种氢溴酸东莨菪碱耳后经皮给药制剂），盐酸美克洛嗪片等，且前者较后者使用方便，对晕动症的缓解与治疗效果更佳^[4]。

1.2 盐酸美克洛嗪和氢溴酸东莨菪碱的概述

1.2.1 盐酸美克洛嗪

1.化学名、分子式和相对分子质量

盐酸美克洛嗪（MZH），其化学名为1-[(4-氯苯基)苯甲基]-4-[(3-甲苯基)甲基]-哌嗪（图1-1）^[5]。分子式为C₂₅H₂₇ClN₂·HCl。相对分子质量为427.41。

图1-1 盐酸美克洛嗪结构式

Figure 1-1 Chemical Structure of Meclizine Hydrochloride

2.物化性质

MZH为淡黄色或黄色的结晶性粉末；微臭，无味。易溶于氯仿、吡啶，溶解于乙醇，极微溶于水，几乎不溶于乙醚。其熔点为224℃并且在此熔点温度下分解。

3.药理作用机制

MZH是第一代哌嗪类组胺H₁受体阻断药，其能有效地特异阻断组胺H₁受体，并且抑制迷走神经的兴奋性，前庭刺激以及延髓化学感受器触发区^[6]。

4.临床应用及不良反应

现临床上多用于缓解和治疗晕动症、前庭源性位置性和持续眩晕^[7]、各种皮肤黏膜过敏疾病，甚至还发现有促进骨骼生长的功能。不良反应有嗜睡、视力模糊、口干、乏力等。还有文献报道盐酸美克洛嗪可诱发孕鼠后代的先天性畸形^[8]。

1.2.2 氢溴酸东莨菪碱

1.化学名、分子式和相对分子质量

氢溴酸东莨菪碱（SH）的化学名为 6β，7β- 环氧-1αH ，5αH-托烷-3α- 醇(－) 托品酸酯氢溴酸盐三水合物（图1-2）。分子式为C₁₇H₂₁NO₄·HBr·3H₂O。相对分子质量为438.31。

图1-2 氢溴酸东莨菪碱结构式

Figure 1-2 Chemical Structure of Scopolamine Hydrobromide

2.物化性质

氢溴酸东莨菪碱为无色或白色结晶状粉末；无臭；微有风化性。易溶于水，极微溶于三氯甲烷，不溶于乙醚。其熔点在195-199℃，熔融的同时发生分解。

3.药理作用机制

氢溴酸东莨菪碱具有的强烈的外周抗胆碱作用，能够特异性地阻断毒蕈碱受体（M-受体），阻止神经递质与受体的结合，从而抑制神经系统^[9]。其所产生的行为效应与脑内海马体被破坏所产生的行为效应有显著的相似之处^[10]。

4.临床应用及不良反应

氢溴酸东莨菪碱是目前临床上用于治疗晕动症最频繁也是最有效的药物^[11]，也可以与抗胃酸悬浮液合用，提高胃内pH，延长作用时间^[12]，延缓胃排空^[13]，治疗胃溃疡；针对小儿肺炎有利于改善脏器尤其是肺的功能，迅速缓解肺炎病情，有显著疗效^[14],此外还用于治疗肺性脑病^[15]，血管迷走性晕厥^[16]，有机磷酸酯类农药中毒的抢救与缓解^[17]和无痛分娩^[18]等。但是由于其容易在人体内积聚，导致视力模糊，头晕，心动过速等不良反应，并且有研究表明氢溴酸东莨菪碱可降低孕母兔体内胎儿和胎盘的胆碱含量（并不降低乙酰胆碱的含量）^[19]，也证明了其对兔胚胎的胆碱能神经的发育会产生干扰^[20]。这些因素限制了其在临床的应用。

1.3 高效液相色谱法

1.3.1 HPLC法的简介

HPLC法是一种重要的科学研究方法，是诸多色谱法中的一个重要分支，，是一种物理化学的分析方法，被人们广泛应用于药物制剂的分析，更是对复方制剂中活性成分含量测定和质量控制和质量保证的首选方法。HPLC法通过将含有待测组分的溶液经过进样系统与不同极性的一种或以多种极性不同的溶液按照某种比例混合而成的不同极性的流动相混合后，经过高压输液泵输送至含有填充剂的色谱柱中，最后使用检测器进行分析。

1.3.2 HPLC法的原理

不同的待测组分中每一种在流动相与固定相之间不同的色谱行为差异，当流动相在不断地流动时，由于不同组分极性的差异，各物质在两相之中进行不断地、多次地分配后依次序地从固定相中被流动相洗脱，从而使各组分分离之后再带入检测器中被检测，最后由计算机生成相应的色谱图供人们进行分析。

1.3.3 HPLC法的优点、缺点以及应用

HPLC法具有优良的专属性、高效能，高速度，应用范围广，分离、分析效率高，重复性好，稳定性高等优点，使得它被广泛应用于药学（药品的质量控制），食品学（食品营养与安全性分析^[21]）等诸多领域。然而它也具有如仪器贵重，分析成本高，修护困难等缺点。

第二章 现有的分别对MZH和SH含量测定方法

2.1 引言

在上一章的叙述中，日本大正药业生产的儿童Sempaa片中MZH和SH是其最主要的两种活性成分，临床上用于缓解和治疗儿童晕动症以及由于晕动症引起的头晕、目眩、呕吐。每两片中含有MZH 25mg和SH 0.16mg。然而，儿童Sempaa片中这两种活性成分目前尚无文献报道可以同时进行含量测定，只能分开测定，这就使得对这种复方片剂的活性成分的含量测定十分不方便。因此在建立新的高效液相色谱法对MZH和SH同时进行含量测定之前，我们查阅了对MZH和SH进行单独测定的一些分析方法。

2.2 文献报道单独地对药物制剂中MZH和SH含量测定的分析方法

Ramalingam Peraman在测定药物制剂中的盐酸美克洛嗪时，使用的流动相为35%甲醇和65%含有0.2%三乙胺的水溶液（pH调至3.0）^[22];另外，还有其他的文献中有报道的使用pH为3.0的甲醇：水=80:20的流动相及缓冲液：乙腈：三氟乙酸=30:70:0.1^[23,24]。张妤琳等人则以pH为6.0的30%磷酸钠缓冲液和70%乙腈作为流动相建立了一种能够对止喘灵注射剂中的氢溴酸东莨菪碱进行含量测定的高效液相色谱法^[25];另有一篇文献中报道了以比例为70:30的pH为5.0的0.5%甲酸：甲醇的混合溶液作为流动相，对药物制剂中的氢溴酸东莨菪碱进行含量测定^[26]。还有使用液质联用（LC-MS/MS）方法测定氢溴酸东莨菪碱也有文献报道：流动相为40%甲醇和60%含2mmol/L甲酸铵的水溶液（用甲酸调节pH至3.52）^[27]。

2.3 《中国药典》中对盐酸美克洛嗪原料药及其片剂的含量测定法^[28]

《中国药典》中记载的对MZH及其药物制剂的含量测定方法并未采用HPLC法进行，而是选择使用高氯酸滴定液（0.1mol/L）进行滴定的容量分析法。

2.3.1盐酸美克洛嗪原料药的含量测定法

取盐酸美克洛嗪样品约0.2g精密称定，用50ml三氯甲烷溶解后，加入50ml冰醋酸、5ml醋酐和10ml醋酸汞试液依照电位滴定法，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于23.19mg的盐酸美克洛嗪。

2.3.2盐酸美克洛嗪片中MZH的含量测定法

取盐酸美克洛嗪片剂20片，精密称定，研细，精密称定取适量（约相当于盐酸美克洛嗪0.2g），置于分液漏斗中，加水50ml，震荡，分别用三氯甲烷50ml、20ml与20ml提取三次，合并三氯甲烷液，置水浴上蒸发至剩10〜15ml放冷加冰醋酸15ml、醋酐5ml、醋酸汞试液5ml与喹哪啶红指示液2滴用高氯酸滴定液(O.1mol/L)滴定至红色消失，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L) 相当于 23.19mg盐酸美克洛嗪。

2.4 《中国药典》中对氢溴酸东莨菪碱原料药及其药物制剂的含量测定法^[29]

《中国药典》中记载的对氢溴酸东莨菪碱及其药物制剂的的含量测定法均使用了HPLC法。

2.4.1 氢溴酸东莨菪碱原料药的含量测定法

1.色谱条件与系统适用性试验

用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.25%十二烷基硫酸钠溶液（用磷酸调节pH值至2.5)-乙腈（60:40)为流动相；检测波长为210nm。理论板数按东莨菪碱峰计算不低于6000。

2.测定法

取氢溴酸东莨菪碱原料药适量,精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml中约含0.3mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取20μl注人液相色谱仪，记录色谱图；另取氢溴酸东莨菪碱对照品，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml中约含0.26mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

2.4.2 氢溴酸东莨菪碱片的含量测定法

1.色谱条件与系统适用性试验

用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.25%十二烷基硫酸钠溶液(用磷酸调节pH值至2.5)-乙腈（60:40)为流动相；检测波长为210nm。理论板数按东莨菪碱峰计算不低于6000。

2.测定法

取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于氢溴酸东莨菪碱0.75mg)，置25ml量瓶中，加水适量，超声使氢溴酸东莨菪碱溶解，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液，精密量取50μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图；另取氢溴酸东莨菪碱对照品，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml中约含0.026mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，并将结果乘以1.141，即得。

2.4.3 氢溴酸东莨菪碱注射液的含量测定法

精密量取本品适量，用流动相稀释制成每1ml中含氢溴酸东莨菪碱0.3mg的溶液，作为供试品溶液。照氢溴酸东莨菪碱含量测定项下的方法测定，计算，并将结果与1.141相乘，即得。

2.5 小结

对盐酸美克洛嗪的含量测定法中，除了《中国药典》中记载的容量分析方法，也有人以甲醇：0.01mol/L pH为7.0的磷酸氢二铵缓冲溶液为88:12作为流动相，对盐酸美克洛嗪进行高效液相色谱法的含量测定^[30]。由于之前的文献资料等并未有对盐酸美克洛嗪和氢溴酸东莨菪碱同时进行含量测定的方法，仅能查阅到对单成分进行含量测定的方法。这也就导致了当盐酸美克洛嗪和氢溴酸东莨菪碱同时作为有效成分被制成药物制剂时无法同时进行含量测定。

第三章 同时测定MZH和SH的高效液相色谱法的建立

3.1前言

在上一章的叙述中表明，我们能在许多文献中查阅到许多对MZH或SH进行单独的含量测定方法，然而却不能查阅到任何一篇文献有关于对二者同时进行含量测定的方法，药典中记载的两种药物的含量测定方法由于会出现裂峰，使得它们均不适合用于对两种药进行同时测定。Ceyhan,T等人建立了一种高效液相色谱法来同时测定药品中硫酸阿托品和氢溴酸东莨菪碱的含量：采用μBondapack C18柱，流速1.0ml/min，等度洗脱。流动相组成为甲醇、水、甲酸(165：35：1；v/v)，用三乙胺调节pH值为8.3。样品在230 nm处用光电二极管阵列探测器进行检测^[31]。本研究的目的是能够开发出一种新的高效液相色谱法，能够对像儿童Sempaa片剂或其他药物制剂中最主要的两种活性成分：MZH和SH，进行含量测定。

3.2 实验部分

3.2.1材料

1．主要仪器

表3-1 实验中用到的主要仪器

2．主要实验试剂和实验材料

表3-2 实验中用到的主要实验试剂和实验材料

所有的药品及试剂均为分析或者色谱级。

3．缓冲溶液的配置

将2.7218g磷酸二氢钾加至1000ml烧杯中加入1000ml双蒸水溶解后，用磷酸将pH调节至4.0，再用0.45μm滤膜过滤并用超声装置进行五分钟的脱气处理。该缓冲溶液被用作稀释剂和流动相之一。

4．最佳吸收波长的选择

精密称取相当于2.5 mg MZH和3.0mg SH的样品量，分别加至两个100 ml容量瓶中后，加入100ml乙腈并定容，再超声处理10min，并通过0.45μm尼龙过滤器抽滤。将上述溶液通过紫外光谱法在190-660nm之间扫描。结合两种药物的吸收波长曲线选择最佳吸收波长。

5．色谱条件

采用低压梯度洗脱。流动相由磷酸二氢钾缓冲液（0.02M，pH4.0）和乙腈以45:55（v /v）的比例组成。用磷酸作为pH调节剂。将流动相脱气之后以1.0ml/min的流速运行。柱温为40℃。进样体积为20μl，检测波长λ= 254nm。

6．标准溶液的配制以及标准曲线的绘制

分别将25mg MZH和30mg SH对照品加入100ml容量瓶，加入适量缓冲溶液超声处理，再加入缓冲溶液定容，震摇，得到两种待测物的标准溶液：250μg/ml的MZH标准溶液和300μg/ml的SH标准溶液。

将MZH标准溶液稀释至浓度范围为25-225μg/ml的系列溶液，将SH标准溶液稀释至浓度范围为30-270μg/ml的系列溶液。用HPLC法分析，绘制出药物浓度-峰面积图。研究分析二者之间是否存在线性关系。

7．样品溶液的制备

精密称取20片每片含有12.5mg MZH和0.08mg SH的儿童Sempaa片并研磨成粉末。精密称取一定量的粉末使其12.5mg MZH和0.08mg SH。将粉末转移至100ml容量瓶中，流动相定容，并用0.45μm滤膜过滤。最终得到的样品溶液含MZH 125μg/ml和SH 800ng/ml。共制备三批样品溶液供检测。

3.2.2 方法

1．重复性

按标准溶液配制的步骤，分别配制6份MZH标准溶液（250μg/ml）和SH标准溶液（300μg/ml），进样分析，计算得相对标准偏差。

2．精密度

将MZH和SH标准溶液连续注入色谱仪6次，进行分析，计算得日内精密度的相对标准偏差。将MZH和SH标准溶液每天同法测定一次，重复6天，计算得日间精密度的相对标准偏差。

3．回收率

为了确定该方法的准确性，对80%，100%和120%三种不同浓度水平的MZH和SH标准溶液进行回收率研究，一式三份。回收率试验中溶液的配制方法为：在10ml容量瓶中加入适量的辅料，分别量取4、5、6ml的MZH和SH标准溶液至容量瓶中，使MZH溶液浓度分别为100µg/ml、125µg/ml以及150µg/ml；SH溶液浓度分别为120µg/ml、150µg/ml以及180µg/ml。将样品溶液进样分析，计算得平均回收率和相对标准偏差。

4．鲁棒性

通过改变一些操作条件如流速和检测波长来进行鲁棒性试验。记录色谱图及峰面积，比较条件改变后对药物峰的影响。

5．检测限（LOD）

根据ICH指南使用以下公式计算检测限：

( 3-1)

其中N是药物峰面积的标准偏差，S是相应标准曲线的斜率。

6．定量限（LOQ）

根据ICH指南使用以下公式计算定量限：

(3-2)

其中N是药物峰面积的标准偏差，S是相应标准曲线的斜率。

3.2.3 结果

1．最佳吸收波长的选择

将MZH和SH乙腈溶液在紫外光下扫描，扫描波长范围为190nm-660nm。两种药物的最大吸收波长见图3-1。当波长为254nm时，两者的吸收相似，且当波长小于254nm时，易有杂质峰的干扰。因此，本研究中选择254nm作为最佳吸收波长。

图3-1氢溴酸东莨菪碱和盐酸美克洛嗪的最大吸收波长

Figure 3-1 λ_max of SH and MZH

2．标准溶液的配制以及标准曲线的绘制

MZH和SH标准溶液色谱图如图3-2所示。色谱图显示，MZH和SH分离度良好，互不影响各自的出峰情况。

线性试验中MZH的浓度范围为25-225μg/ml，SH的浓度范围为30-270μg/ml。标准曲线图表明药物的浓度与峰面积之间成线性关系。MZH的线性回归方程为y=20029x-29837，相关系数r²=0.999。SH的线性回归方程为y=442.7x 2501.9，相关系数r²=0.998。

图3-2 MZH和SH标准溶液色谱图

Figure 3-2 Chromatogram for Standard MZH and SH

3．样品溶液

儿童Sempaa片的液相色谱图如图3-3所示，每片中的药物含量如表3-1所示。

图3-3 市售片剂色谱图

Figure 3-3 Chromatogram for Commercial tablets

表3-3 市售片剂含量分析

Table 3-3 Analysis of Marketed Formulations

由表3-3中结果表明，该液相方法可以检测出儿童Sempaa片中MZH和SH的含量，相对百分含量分别为99.36%和95%。

3.2.4 方法学验证

1．重复性

表3-4 重复性试验

Table 3-4 Repeatability study of MZH and SH

验证本实验的重复性的数据如表3-4所示。根据表内数据得出，MZH和SH二者的试验的相对标准偏差依次是0.81%与0.92%，均小于2%，符合样品测定要求。说明本实验方案重复性好。

2．精密度

表3-5 精密度试验

Table 3-5 Precision Study of MZH and SH

精密度试验结果如表3-5所示。从表中数据可知，MZH日内和日间精密度的相对标准偏差分别为0.87%和1.37%。SH日内和日间精密度分别为0.64%和1.49%。均不大于2%，符合样品检测要求。该试验结果证明本实验方案精密度高。

3．回收率

表3-6 MZH回收率（n=6）

Table 3-6 Recovery Study of MZH (n=6)

表3-7 SH回收率（n=6）

Table 3-7 Recovery Study of SH (n=6)

由表3-6、3-7可知，MZH和SH二者的平均回收率依次是99.78%与100.82%，在98%-102%之间，符合检测要求。说明本实验方案的回收率较高。

4．鲁棒性

鲁棒性实验结果如图3-4、3-5、3-6及表3-8、3-9所示。

图3-4鲁棒性试验色谱图

（波长：254nm，流速：1.0ml/min）

Figure 3-4 Chromatogram for Robustness of MZH and SH

(wavelength: 254nm, flow rate:1.0ml/min )

图3-5 鲁棒性试验色谱图

（波长：246nm，流速：1.0ml/min）

Figure 3-5 Chromatogram for Robustness of MZH and SH

(wavelength: 246nm, flow rate:1.0ml/min)

图3-6 鲁棒性试验色谱图

（波长：254nm，流速：0.6ml/min）

Figure 3-6 Chromatogram for Robustness of MZH and SH

(wavelength: 254nm, flow rate:0.6ml/min)

表3-8 MZH鲁棒性试验结果

Table 3-8 Robustness Study of MZH

表3-9 SH鲁棒性试验结果

Table 3-9 Robustness Study of SH

鲁棒性试验结果表明，改变检测波长或者流速对MZH和SH药物峰的检测没有影响，说明本实验方案稳定性好。

5．检测限（LOD）

MZH和SH的检测限分别为5ng/ml和108ng/ml。

6．定量限（LOQ）

MZH和SH的定量限分别为16ng/ml和359ng/ml。

3.3 小结

通过对分析方法的建立，进行实验，以及实验的方法学验证，我们得出如下几点结论：

1、最佳吸收波长：当扫描波长为254nm时，两种药物的乙腈溶液吸收行为相似，而小于254nm时易出现杂质峰产生干扰，大于254nm时则吸收行为相差较大，因此以254nm作为最佳吸收波长。

2、标准溶液的配制及标准曲线的绘制：实验中，MZH和SH两种药物的标准溶液的高效液相色谱图显示分离度良好，样品峰没有互相干扰的现象。线性实验中表明药物浓度与峰面积之间成线性关系。

3、样品溶液：经过对市售的儿童Sempaa片进行高效液相色谱法分析，结果表明本实验方案可以检测出此种片剂中的MZH和SH的含量。

4、重复性：重复性实验中，MZH和SH两种药物的相对标准偏差均小于2%，符合规定的样品测定要求。证实本实验方案重复性好。

5、精密度：精密度实验中，两种药物的日内精密度和日间精密度的相对标准偏差均小于2%，符合规定的样品检测要求。证实本实验方案精密度高。

6、回收率：回收率实验中，MZH的平均回收率为99.78%，SH的平均回收率为100.82%。说明证实本实验方案回收率高。

7、鲁棒性：鲁棒性实验中，通过使用不同流速（0.6ml/min和1.0ml/min）和不同吸收波长（246nm和254nm）进行高效液相色谱实验，分析色谱图和实验数据后发现改变检测波长或流速对MZH和SH的药物峰无明显影响。说明证实本实验方案的稳定性好。

第四章 结果与讨论

由于像儿童Sempaa片剂等以盐酸美克洛嗪和氢溴酸东莨菪碱为主要成分的用于缓解和治疗晕动症的药物制剂，在进行质量检查，保证药品质量的时候，两种主要药效成分需要分开检测，检测过程步骤繁琐，给科学研究和中试生产带来诸多不便。本研究新建立的高效液相色谱法，旨在能对药物制剂中的盐酸美克洛嗪和氢溴酸东莨菪碱同时进行含量测定，给科学研究和生产带来便利。

本研究中，我们首先对两种被测药物的结构、物理和化学性质、药物作用机理、临床应用和不良反应。在充分了解化合物性质之后，我们通过查阅《中国药典》和文献，了解科研工作者们之前对MZH和SH单独的分析方法，或者是这两种化合物和其他化合物的分析方法，重点阅读和参考其中高效液相色谱法的部分。最后根据先前阅读文献中积累的他人的经验结合自己平时做实验的经验，对文献查到的色谱参数进行了优化，建立了一个能同时分析MZH和SH的高效液相色谱法。

该液相条件中设定流速为1.0ml/min，流动相为55%浓度为0.02mol/L的磷酸二氢钾溶液（pH4.0）和45%乙腈，检测波长为254nm。在此条件下药物峰的分离度大于1.5，MZH和SH的保留时间分别为7.068min和2.148min。MZH和SH的浓度和峰面积分别在25-225μg/ml和30-270μg/ml的区间内线性关系表现较好，相关系数满足条件。MZH和SH的检测限分别为5ng/ml和108ng/ml，定量限分别为16ng/ml和359ng/ml。

并且此次研究新建立的方法在研究过程中，方法重复性好、精密度高，回收率符合检测要求，在鲁棒性试验条件下，峰面积没有发生明显的变化，说明其稳定性好。适用于对原料药或者药物制剂中同时含有盐酸美克洛嗪和氢溴酸东莨菪碱的含量测定。

第五章 展望

近年来，随着医学，药学领域的发展，人们对许许多多的疾病有了更多、更加深入的了解。与此同时，人们也发现了很多具有药理活性的化合物，通过对这些化合物的合理使用，成功缓解和治愈了许多疾病。然而现在针对某种疾病的药物制剂往往都是复方制剂，这就使得分析工作变得困难。本实验仅仅研究了以盐酸美克洛嗪和氢溴酸东莨菪碱为主要活性成分的药物制剂的含量测定，对于其他含有多种活性成分的药物制剂并不适用，而且我们只建立了一种高效液相色谱法，可能还有其他操作更加简单，技术更加成熟的方法。

本研究建立的方法简单，准确，灵敏，快速，稳健和经济，能够同时测定儿童Sempaa片中MZH和SH的含量。分析条件在短时间内得到很好的分辨率。所有参数的%RSD都在限定范围内。这表明用这种方法得到的结果和预期结果是一致的。因此所开发的方法可用于固体制剂中MZH和SH的同时检测和质量控制。

第六章 致谢

首先感谢我的指导老师陈国广教授，感谢他这一学期以来在学术上的精心指导与在日常生活中的悉心关照。陈老师平日里朴实的生活作风和严谨的科研精神深深地影响了我，这将是我人生中宝贵的财富。

感谢实验室任丽莉副教授平日里在实验室里对我的关心与帮助。

王晶晶师姐和王瑾师兄在我做实验的过程和毕业论文的撰写中给予了重要的指导与帮助，我在此对他们深表感谢。

感谢我的同窗尤其是劳珊莉同学还有其他师兄师姐对我的鼓励与热心帮助。

感谢我的家人的支持与鼓励。

参考文献

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[2]Kuritzky A , Ziegler D K , Hassanein R . Vertigo, Motion Sickness and Migraine[J]. Headache, 2010, 21(5):227-231.

[3]Treisman M. Motion sickness: an evolutionary hypothesis[J]. Science, 1977, 197(4302):493-495.

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