摘 要

尽管最近在治疗病毒性肝炎方面取得了进展，但肝脏相关死亡率很高。有研究发现62％肝癌病例中 YAP 都明显升高，且 YAP主要表达于肿瘤的核心位置。TAZ（一种Hippo信号传导效应子），是肝再生所必需的，它通过IL-6诱导的肝细胞增殖和肝损伤后细胞死亡的抑制刺激肝再生。Hippo信号通路在肝细胞的发育，死亡，再生及转化为癌细胞等调控肝脏稳态的各方面都有很大影响。Hippo信号通路的失调会抑制肝脏再生，同时无法控制肝脏的过度生长和癌化，导致肝脏组织的动态失衡。WBP2是增强YAP / TEAD介导的基因转录的YAP的重要辅因子，它与TAZ（YAP/TAZ）的相互作用依赖于TAZ的WW结构域和Wbp2的含PPXY的C末端区域，从而增强了癌基因TAZ的转化能力。我们以斑马鱼为实验动物通过PCR实验证实了斑马鱼各组织中WBP2基因的表达，通过斑马鱼整胚原位杂交证实了斑马鱼各组织中WBP2基因在蛋白水平的表达。并且，我们通过对0.025%TAA暴露组和正常组肝组织的对比，发现TAA暴露组的WBP2浓度更低。由此，我们推测WBP2对于维持肝脏的稳态具有积极作用，并且我们猜想WBP2与YAP在维持肝脏稳态中是合作关系。

关键词：肝纤维化 WBP2 斑马鱼 YAP

Exploration of the interaction between WBP2 and Yap in liver fibrosis

Abstract

In recent years, the mortality rate of liver-related diseases is high, but there has been no good solution. Some studies have found that 62% of liver cancer cases have a significant increase in YAP, and YAP is mainly expressed in the core position of the tumor. TAZ (a Hippo signal transduction effector) is necessary for liver regeneration. It has the function of inducing liver cell regrowth and inhibiting hepatocellular carcinoma. Hippo signaling pathway plays an important role in the regulation of liver homeostasis, such as hepatocyte development, death, regeneration and transformation into cancer cells. The imbalance of Hippo signaling pathway will inhibit liver regeneration, at the same time, it will not be able to control the excessive growth and carcinogenesis of the liver, resulting in the dynamic imbalance of liver tissue. WBP2 is an important cofactor to enhance YAP/ TEAD-mediated gene transcription of YAP. Its interaction with TAZ (YAP/TAZ) depends on the WW domain of TAZ and the C-terminal region of Wbp2 containing PPXY, thus enhancing the transformation ability of cancer gene TAZ. We used zebrafish as experimental animals to detect the expression of WBP2 in zebrafish tissues by PCR and whole embryo in situ hybridization experiments. Moreover, by comparing the liver tissues of the TAA exposed group and the normal group, we found that the concentration of WBP2 in the TAA exposed group was lower than that in the normal group. Thus, we speculate that WBP2 has a positive effect on the homeostasis of the location liver, and we suspect that WBP2 and YAP are cooperative in maintaining liver homeostasis.

Keywords：Hepatic fibrosis； WBP2； Zebrafish ；YAP

目录

摘要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1肝纤维化形成机制 1

1.1.1肝纤维化的形成机制 1

1.1.2肝纤维化的治疗方法 1

1.1.3肝损伤模型概述 2

1.2 Hippo 信号通路与肝损伤的发生及进程 2

1.2.1Hippo信号通路介绍 2

1.2.2 Hippo 信号通路在肝损伤中的作用 3

1.3 WBP2与Yap在肿瘤中的相互作用 4

第二章 实验流程 5

2.1 实验方案设计 5

2.2实验材料与仪器 5

2.3实验流程 6

2.3.1 WBP2基因表达序列在不同物种的同源相似性比较 6

2.3.2 PCR检测成鱼不同器官WBP2的表达情况 7

2.3.3 PCR检测WBP2基因在正常组和TAA暴露组的肝脏中的表达情况 12

2.3.4 PCR检测WBP2基因在斑马鱼不同时期胚胎中的表达情况

13

第三章 结果与讨论 15

3.1WBP2基因表达序列在不同物种的同源相似性分析结果 15

3.2 PCR检测WBP2在不同时期斑马鱼胚胎中的表达情况结果 18

3.3 PCR检测WBP2在成鱼不同器官中的表达情况结果 20

3.4 PCR检测WBP2在正常组和TAA暴露组肝脏中的表达情况结果 21

第四章 结论与展望 22

4.1本文结论 22

4.2未来展望 22

参考文献 23

致谢 27

第一章 文献综述

1.1肝纤维化形成机制

1.1.1肝纤维化的形成机制

肝脏是人类腹腔内最大的代谢器官，它在人体内承担着的重要生物学功能。慢性肝脏炎症是细胞外基质积聚的主要驱动力，可导致肝硬化，导致并发症，如门静脉高压症和肝细胞癌[1,2]。细胞外基质蛋白积聚会导致肝脏结构发生扭曲，使再生肝细胞结节转变为肝硬化，也就是晚期的肝纤维化[3]。如图1-1所示，损伤的肝细胞引起的炎症及星形细胞的活化相互作用，共同引发基质的产生、降解和重构，最终导致肝纤维化，肝功能衰竭、肝癌和肝细胞功能障碍等均由严重的肝纤维化引发而来[4]。

1.1.2肝纤维化的治疗方法

肝硬化的经济负担很重要，2008年美国的治疗费用从1400万美元到20亿美元不等，具体治疗费用根据病因不同而不同 [5]。尽管最近在治疗病毒性肝炎方面取得了进展，但肝脏相关死亡率很高，可能是由于晚期酒精相关性肝病的负担很大。肝癌和疾病已成为中国死亡的主要原因。包括肝功能衰竭和肝癌在内的

肝脏疾病可能是遗传性的，也可能是由多种损害肝脏的因素引起的鉴于肝硬化是一个与严重的社会经济负担相关的世界性问题，有效的治疗策略将会产生影响。肝纤维化在进展到肝硬化前通常无明显症状故难以诊断，待其进展到肝硬化时可逆性范围则十分局限，治疗难度高。现通常使用肝活检的方式检查肝损伤和肝纤维化程度，此方法具有一定缺点，准确度不高[6]。另有一廉价准确的方法多用于肝纤维化的诊断，即超声波检查，但此方法不适用于腹水患者和肥胖患者的肝纤维化检查，局限性较高[7]。肝移植是治疗终末期肝病的有效方法，但供体稀缺和免疫排斥限制了其临床应用，并且他们的预后仍然很差[8]。总之，在肝纤维化的早期诊断方面，现有方法各有其缺点，而肝病的终末期的治疗方面也因免疫排斥和供体稀缺的原因，无法大范围进行临床应用。

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