摘 要

肺癌是亚洲常见的一种疾病，是对人类健康和生命最具有威胁的恶性肿瘤之一，它的发病率和死亡率增长迅速。斑马鱼和人类具有85%的基因同源性，是研究人类疾病的好帮手。将人类癌细胞异种移植到斑马鱼体内，可用于进一步评估癌症和筛选药物。肿瘤在生长过程中，抑制肿瘤细胞的增殖对于抗肿瘤进展具有重大意义。复方苦参注射液能提高机体细胞活力, 而且能够抑制实体瘤的生长。本论文以肺癌细胞异种移植的斑马鱼为模型，对临床上药物复方苦参注射液的抗肿瘤细胞增殖活性进行评价，为抗癌药物的研发提供了平台和依据。

关键词: 肺癌 斑马鱼 异种移植模型 复方苦参注射液

Study on the anti-tumor cell proliferation activity of compound radix sophorae injection based on zebrafish xenotransplantation model

Abstract

Lung cancer is a common disease in Asia and one of the most threatening malignant tumors in human health and life. Its morbidity and mortality are growing rapidly. Zebrafish and human beings share 85% of the same gene, which is a good helper to study human diseases. Xenotransplantation of human cancer cells into zebrafish could be used to further assess cancer and screen drugs. In the process of tumor growth, inhibition of tumor cell proliferation is of great significance for anti-tumor progress. Compound radix sophorae flavescens injection can improve cell viability and inhibit the growth of solid tumor. In this paper, zebrafish xenotransplantation of lung cancer cells was used as the model to evaluate the anti-tumor cell proliferation activity of the clinical drug compound radix sophorae injection, providing a platform and basis for the development of anti-cancer drugs.

Keywords ；Lung cancer；zebrafish；Xenotransplantation model ；Compound sophora flavescens injection

目录

摘 要 I

Abstract II

第一章 前言 1

第二章 文献综述 2

2.1斑马鱼与异种移植 2

2.1.1斑马鱼简介 2

2.1.2斑马鱼的孵化过程 3

2.1.3斑马鱼的生物学特点 3

2.1.4斑马鱼异种移植模型应用 3

2.2肺癌 4

2.2.1肺癌简介 4

2.2.2肺癌现状 4

2.3复方苦参注射液 4

2.3.1来源 4

2.3.2作用 5

第三章 实验材料与方法 6

3.1实验材料 6

3.1.1 斑马鱼的饲养 6

3.1.2药物简介 6

3.1.3 主要试剂和仪器 6

3.1.4实验设计 7

3.2实验方法 8

3.2.1斑马鱼胚胎处理 8

3.2.2肺癌细胞培养和标记 8

3.2.3斑马鱼肺癌细胞异种移植最适移植温度的摸索实验 9

3.2.4肺癌细胞A549的斑马鱼肿瘤异种移植模型的建立 9

3.2.5复方苦参注射液对斑马鱼异种移植模型最大安全剂量摸索 9

3.2.6比较复方苦参注射液和康莱特对肺癌细胞的抗增殖活性 9

第四章 实验结果与讨论 11

4.1实验结果与统计分析 11

4.1.1斑马鱼肺癌细胞异种移植最适移植温度 11

4.1.2复方苦参注射液对斑马鱼异种移植模型最大安全剂量 12

4.1.3复方苦参注射液和康莱特对肺癌细胞A549的抗增殖活性 13

4.2实验结论与讨论 13

参考文献 15

致谢 18

1. 前言

20世纪初，肺癌在世界上还是一种比较罕见的肿瘤，但是从20世纪50年代开始，随着全球工业化的快速发展，空气污染的日益加重，以及吸烟人数有增无减,肺癌在恶性肿瘤中的发病率越来越高,同时由于肺癌恶性程度高，而症状很不明显，筛查手段尚未普及，很难早期去发现，因此，患上肺癌后死亡率就很高[1]。在我国，2015年新发恶性肿瘤患者429万人，其中肺癌为73万人 占所有新发恶性肿瘤患者的17%[2]。斑马鱼体型小，产卵量大，胚胎透明，易观察，与人类基因有很大的相似之处[3]。复方苦参注射液作为一种临床中医药制剂，在抗肿瘤中疗效突出且副反应少。大量的研究表明，复方苦参注射液主要是通过调控肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞的分化与凋亡、抑制肿瘤细胞的侵袭与转移、减少肿瘤新生血管的生成、调节肌体免疫力等来发挥抗肿瘤作用[4]。临床上复方苦参注射液广泛用于治疗肺癌、食管癌、胃癌、肝癌、结肠癌、乳腺癌等多种肿瘤，并常与化疗、放疗、热疗、靶向治疗等多种抗肿瘤治疗手段联合[5]。在生命科学领域，斑马鱼作为一种常用的模式动物，正好可以弥补细胞实验和动物实验的各种不足,斑马鱼与人类基因具有高达85％的同源性，其信号传导通路、生理结构与功能等均与哺乳动物高度相似，这意味着用斑马鱼开展药物实验所得到的结果在多数情况下也适用于人体,同时，斑马鱼实验是一个整体动物实验，它能准确反映待测药物在体内的分布、代谢等动态生理过程[6]。因此选择以斑马鱼为模型，对复方苦参注射液进行抗肿瘤增殖活性评价。

第二章 文献综述

2.1斑马鱼与异种移植

2.1.1斑马鱼简介

斑马鱼（Danio rerio)，又名蓝条鱼、花条鱼、斑马担尼鱼，是淡水水族箱观赏鱼，原产于印度、孟加拉国[7]。斑马鱼身体细长而略呈纺锤形，头小而稍尖，吻较短，斑马鱼全身布满多条深蓝色纵纹，与银白色或金黄色纵纹相间排列，纹路比较有条理[8]。，斑马鱼鳍条宽大伸展，身形流畅，外观美丽。

自二十世纪九十年代,斑马鱼就开始被用于研究新药的筛选[9-10]。斑马鱼养殖方便、体外受精且产卵量大，是低费用的实验器材。此外，斑马鱼受精后72hpf全身透明,因此可直观监测多个器官对药物的毒性及致畸性反应[11-12]。斑马鱼模型实验过程观察方便、药物用量少、实验周期短，实验结果可全自动化分析，该模型由于这些优点逐渐发展成为成为遗传学、分子发育生物学、环境毒理学等学科的热点模型[13-14]。斑马鱼还因为其基因与人类基因有高达85%的同源性而受到生物学家的重视，因此，在很大程度上表明对其所做实验得出的数据对人体同样适用[15-16]。