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摘 要

补体C3免疫比浊法检测试剂盒的研制，经过对于不同厂家的抗体与不同缓冲液配比的测试，以及后续的一些实验的质控，稳定性等的测试，最终确定了该补体C3试剂盒的各项指标能够达到对于临床检测的要求，能够有很大的应用前景（如免疫性肝炎的检测），能够为临床早诊断、早治疗提供可靠的科学理论依据。也对以后能够进一步优化实验奠定了基础。

关键词: 补体C3；免疫比浊法；检测试剂盒；缓冲液

Development of Complement C3 Immunoturbidimetric Assay kit

Abstract

C3 immune turbidimetry detection kits, through to the antibodies of different manufacturers and different buffer ratio test, and subsequent experiments of quality control, stability test, finally determine the C3 kits can reach to the requirement of clinical testing, the indicators can have great application prospect (e.g., detection of autoimmune hepatitis), can provide reliable for clinical early diagnosis, early treatment of scientific theory .It also lays a foundation for further optimization of experiments in the future.

Keywords: Complement C3; Immunoturbidimetry; Detection kit; Buffer

目 录

摘 要 I

Abstract II

第一章 引 言 1

1.1实验基本介绍 1

1.1.1实验设计背景 1

1.1.2补体C3的意义 1

1.1.3免疫性肝炎 1

1.1.4免疫比浊法 2

第二章 实验仪器原料 3

2.1仪器与原料 3

2.1.1主要仪器 3

2.1.2主要原料 3

第三章 试剂配制方法记录 4

3.1配制方法 4

3.1.1缓冲液的配制 4

3.1.2试剂的配制 5

3.2实验条件 6

3.3校准品 6

3.4检验原理 6

第四章 实验方案测量记录 7

4.1实验方法和数据记录 7

4.1.1菲鹏抗体的实验操作内容及数据分析 7

4.1.2菲鹏抗体最终的试剂配方确认 13

4.2南京澳林生物科技有限公司部分数据 13

4.2.1 ABM试剂定标 13

4.2.2捷门抗体定标 14

4.2.3阿匹斯抗体定标 14

4.2.4南方基因抗体定标 15

4.2.5南京澳林生物数据分析 15

第五章 实验性能测试记录 16

5.1朗道质控的测试 16

5.2血清样本的测试 16

5.3稳定性的测试 16

5.3.1稳定性的定义 16

5.3.2稳定性测试的值 16

5.3.3稳定性测试的结论 17

5.4干扰实验 17

第六章 结 论 18

致 谢 19

参考文献 20

第一章 引 言

1.1实验基本介绍

1.1.1实验设计背景

近年来，随着社会的不断进步发展，越来越高的疾病发病率在我们的生活中出现，悄无声息的出现在人类的生活，影响着人类的健康。所以我们需要进行提前的预防，检测，并及时对产生的生理病理上的问题进行治疗，做到有效的防治疾病的发生，降低恶性病情的发病率。^[1]

目前的科学研究表明，补体系统是一组存在于人和动物体液中及细胞表面，经活化后具有生物活性，可以介导免疫和炎症反应的蛋白。^[2]补体系统由近40种成分组成，多数组分为糖蛋白。在1890年由比利时医生J.Bordet发现，1894年他进一步通过细菌抗血清实验证实补体的存在。补体系统参与机体的特异性和非特异性免疫机制，表现为抗微生物防御反应，免疫调节及介导免疫病理的损伤性反应，是体内一个重要的效应系统和效应放大系统，而补体C3是补体系统中含量最高的成分。^[3]

1.1.2补体C3的意义

补体C3基因：人类补体C3基因位于19号染色体Ritg用蛇毒处理血清时发现的。在补体各成分中，C3的血清含量最高；在功能上，C3亦居于中心地位，它既是几条激活途径的交汇，又是C3b依赖性阳性反馈环路的基础；同时，C3裂解片段及其结合蛋白复杂而多样，在免疫调控以及免疫病理中发挥着重要作用。^[4]

补体C3的临床意义：补体动态变化在临床上的医疗意义越来越重要，并受到大多数的人的重视。抗原-抗体复合物引起的胃炎病人血清总补体和C3均会有明显的下降。大多数的全身性红斑狼疮患者血清补体的下降和病情的恶化有很大的关系。活动性全身性红斑狼疮患者血清中对的C1、C2、C3和C4的降低，在病人的病情缓解时血清补体水平恢复正常。传染病及组织损伤和急性炎症时候，C2、C3、C4均增加，总补体活性正常或升高，但是晚期便会降低。肿瘤患者的补体量升高，特别是肝癌患者，C3升高的最为明显，具有诊断意义。也有过报道，胰腺癌晚期与隐性淋巴细胞白血病患者C3降低。肝脏疾病患者C3多为降低，肾移植病人C3的水平不稳定，C3在排异反应开始升高后会降到正常以下。继发性补体C3缺乏远多于先天缺乏。大肠杆菌和脑膜炎球菌败血症时，C3水平显著下降，在C3肾炎因子引起的慢性补体性肾炎中，C3水平降低到正常值的10%时，会发生严重化脓性感染。在C3缺乏时往往与其他的防御机能的抑制因素相结合时，会增加了机体感染的危险性，比如严重烧伤和溶血性贫血疾病。^[5]

1.1.3免疫性肝炎

自身免疫性肝炎作为一种慢性进行性肝脏炎症疾病，遗传易感性是此类疾病的主要致病因素，在患者自身免疫耐受被破坏后，自身免疫反应导致肝内实 质细胞损伤。自身免疫性肝炎患者中女性占较大比例，主要表现为慢性肝炎、肝功能衰竭，也有部分患者并无任何临床症状，但在肝功能异常后被诊断出，因此及早有效诊断疾病对于患者的治疗及预后具有重要意义。补体系统是机体内天然免疫的重要部分，机体内的免疫调节及炎症反应均与补体系统具有相关性。血清补体C3是由肝细胞合成的，自身免疫性肝炎病情程度与血清补体C3水平的相关性目前仍不明确。为此，本研究对收治的自身免疫性肝炎患者，通过检测其血清补体C3水平状况，从而为评估患者病情提供依据。^[6]

自身免疫性肝炎是由自身免疫反应介导的慢性进行性肝脏炎症性疾病，其临床特征为不同程度的血清转氨酶升高、高γ-球蛋白血症、自身抗体阳性，组织学特征为以淋巴细胞、浆细胞浸润为主的界面性肝炎，严重病例可快速进展为肝硬化和肝衰竭。该病在世界范围内均有发生， 在欧美国家发病率相对较高，在我国其确切发病率和患病率尚不清楚，但国内文献报道的病例数呈明显上升趋势。^[7]

1.1.4免疫比浊法

免疫比浊法：免疫比浊法（Immunoturbidimetric Assays）是抗原抗体结合动态测定方法。其基本原理是：当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规定抗体过量)时，形成的可溶性 免疫复合物在稀释系统中的促聚剂（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使反应液出现浊度。当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加。通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样中抗原的含量。

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