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摘 要

本课题研究了一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶（Glycyl-proline-dipeptidyl aminopeptidase，GPDA）校准品的制备方法，即真空冷冻干燥工艺。用50mmol/LTris溶液作为缓冲液，通过正交试验选取最佳基础液配方：即7.0%BSA、0.5%蔗糖、0.5%甘露醇及0.1%叠氮钠。然后将最佳配方制得的校准品，放置到-80℃、-60℃、-20℃进行预冻，找到最佳预冻条件：-60℃12小时。通过改变冻干条件对工艺条件进行优化，优化工艺：-40℃12小时，-30℃12小时，0℃3小时，25℃3小时。最佳冻干品用澳林生物科技有限公司最新批号、效期一年及以上的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶（GPDA）在AU480生化分析仪上对校准品进行冻干前检测，记录检测结果，记录检测结果，计算冻干得率，重复性、稳定性等相关检测。

关键词：甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶；校准品；冻干

The Invention Relates to Glycine Proline Dipeptide Aminopeptidase Calibration Substance

Abstract

This paper deals with the preparation method of a glycyl-proline-dipeptidyl aminopeptidase (GPDA) calibration product, namely vacuum freeze drying process. With 50mmol/LTris solution as buffer, the optimal formula of base solution was selected through orthogonal test, and three influencing factors were selected in the orthogonal test: namely 7.0%BSA, 0.5% sucrose, 0.5% mannitol and 0.1% sodium azide. Then the best formula of calibration, placed at different temperatures, precool, find the best precool conditions: - 65 ℃ for 24 hours. By changing the conditions of freeze-dried optimize the process conditions, optimization of process: 12 hours to 40 ℃, and 30 ℃ for 12 hours, 0 ℃ for 3 hours, 25 ℃ for 3 hours. Best avoiding cold with the latest batch number, in that the biological technology co., LTD. Effective and above a year of gansu ammonia acyl proline dipeptide aminopeptidase (GPDA) on AU480 biochemical analyzer calibration prior to lyopHilization test, record test results, calculation of freeze-dried yield and related testing.

Keywords:Glycine proline dipeptide aminopeptidase; Calibration; Freeze-dried

目录

摘要 Ⅰ

Abstract Ⅱ

第一章 引言 1

1.1体外诊断试剂的概述 1

1.2校准品 1

1.2.1校准品的概念 1

1.2.2校准品的应用 1

1.3真空冷冻干燥技术 2

1.3.1真空冷冻干燥的特点 2

1.4博医康Pilot3-6ES冻干机标准操作规程 2

1.4.1预冻 2

1.4.2冻干 2

1.4.3关机 3

第二章 猪肾提取液的处理 4

第三章 基础液的制备 5

3.1 0%、5%、7%、8%、10%BSA溶液的配制 5

3.2 0%、0.5%、2%、5%、10%蔗糖溶液的配制 6

3.3 0%、0.5%、2%、5%、10%甘露醇溶液的配制 8

第四章 最佳缓冲液的选择 10

第五章 最佳预冻条件 11

5.1 校准品的配制 11

5.2 校准品最佳预冻温度的选择 11

第六章 最佳冻干工艺 13

6.1 校准品的配制 13

6.2 冻干条件的选择 13

第七章 冻干品的性能检测 14

7.1 校准品物理性质 14

7.2 冻干得率 14

7.3 重复性 15

7.4 批内差 15

7.5 批间差 15

7.6 稳定性 16

致谢 17

参考文献 18

第一章 引言

1.1体外诊断试剂的概述

近二十年随着经济的快速发展和科技的飞速进步，现代生物技术得以改进和提高，同时伴随着人民群众生活水平的提高和与日俱增的社会压力，人们对自身的身体健康状况和现代医疗品质也有了更高的需求，因此体外诊断行业伴随着现代医疗需求运用而生。由于体外诊断方式能在疾病发生早期快速地、准确地做出诊断，所以很快就在临床治疗方面发挥重要作用，并且在医疗界立足。基因组学、分子生物学等基础学科的发展,促进了体外诊断试剂的开发应用和更新换代,使其在疾病诊治中发挥越来越重要的作用。^[1]虽然中国体外诊断行业发展较晚，但是巨大的市场需求使民族产品迅速崛起，同时体外诊断行业也是我国重点支持的行业之一。天时地利人和，体外诊断试剂行业目前的国内市场，一方面市场潜力很大，同时行业发展空间也很大；另一方面，因为民族产品发展迅速，所以最开始进口试剂及诊断仪器在国内市场的垄断优势正在被民族产品打破和制约。^[2]

体外诊断试剂是指按医疗器械管理的体外诊断试剂，其目标是让全人类共享诊断高速。体外诊断试剂包括可单独使用或与仪器、器具、设备或系统组合使用，在疾病的预防、诊断、治疗监测、愈后观察、健康状态评价以及遗传性疾病的预测过程中，用于对人体样本（各种体液、细胞、组织样本等）进行体外检测的试剂、试剂盒、校准品（物）、质控品（物）等。^[3]体外诊断试剂行业先后经历了化学、酶、免疫测定和探针技术四次技术革命，^[4]每一次技术革命都使体外诊断试剂跨上了一个新的台阶,不仅灵敏度、特异性有了极大提高,而且应用范围迅速扩大,操作门槛逐步降低,商业价值也日趋重要，体外诊断行业已然成为朝阳产业。

体外诊断试剂较传统诊断方法更安全、更准确、更快速。

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